海藻中提取铁超氧化物歧化酶的方法

摘要

本发明公开了从海藻中提取铁超氧化物歧化酶(Fe-SOD)的方法。由于该方法是从天然材料中提取铁超氧化物歧化酶，海藻原料充足，不存在紧缺现象，同时材料成本相对于提取产品来说也是十分低廉。得到的产品比活相当高，活力损失相对较小，可以满足一般的医药需求，并且符合当代人“崇尚自然，回归自然”的心理需求，不存在转基因生产导致的基因污染问题。工艺中采用了DEAE-Sepharose Fast Flow和CM-Sepharose Fast Flow两种层析材料，其特点是流速快、可大量分离样品，同时可反复再生利用，能实现大规模工业化生产。

主权项

1.海藻中提取含铁超氧化物歧化酶的方法，其特征是包括以下步骤：1)取新鲜海藻以1∶2～3的重量体积比加入pH值7～8、浓度为50～100mmol/L、含0.5mmol/L EDTA的磷酸缓冲液，将混和液进行超声破碎，破碎液离心，取上清；2)将上清在50℃～55℃水浴中不断搅拌，进行热变性处理，去杂蛋白；3)离心步骤2)所得上清液，加入(NH4)2SO4至饱和浓度40～50％，静置6小时以上，再离心、取上清，在上清液中加(NH4)2SO4至饱和浓度85％，静置6小时以上，离心、取沉淀；4)取步骤3)所得沉淀，用pH值7～8，浓度为10mmol/L，含0.5mmol/LEDTA的磷酸缓冲液溶解，上Sephadex G-25脱盐柱，用自动收集器收集酶活性部分；5)将步骤4)收集的酶活性部分上阴离子DEAE-Sepharose Fast Flow交换层析柱，用pH7.0～8.0，浓度为10mmol/L含0.5mmol/L EDTA的磷酸缓冲溶液作梯度洗脱，盐梯度为0～0.8mol/L NaCl，收集酶活性部分；6)将步骤5)收集的酶活性部分经透析后上阳离子CM-Sepharose FastFlow交换层析柱，用pH值5.0～5.8，浓度为2.5mmol/L、含0.5mmol/L EDTA的醋酸缓冲溶液作梯度洗脱，盐梯度为0～0.8mol/L NaCl，流速控制在12ml/min，再收集酶活性部分；7)将步骤6)收集的活性部分上分子筛Sephadex G-100/SephadexG75柱，用pH值7～8，浓度为10mmol/L含0.5mmol/L EDTA的磷酸缓冲液洗脱，收集活性峰，活性峰用双蒸水透析，透析完全得样品溶液，用聚乙二醇20000浓缩，冻干，即得含铁超氧化物歧化酶。