减毒株脊髓灰质炎灭活疫苗后处理方法

摘要

本发明提供一种减毒株脊髓灰质炎灭活疫苗后处理方法，它将大规模培养出来的病毒液经过1.0－0.6μm、0.6－0.45μm、0.45－0.22μm孔径的三级滤柱过滤、澄清，超滤浓缩，柱层析纯化及灭活等后处理工艺，将病毒液制备成纯度高、免疫原性及安全好、质量稳定的合格疫苗半成品，从而满足减毒株脊髓灰质炎灭活疫苗的生产需要。本发明可大规模处理大量的病毒液，且生产工艺稳定，重复性好；用本发明生产的疫苗半成品，无外原因子污染，细胞DNA残留量少，灭活后的半成品经检查无活病毒存在，安全可靠，半成品抗原含量高，能够满足成品生产的需要；用本发明生产的疫苗半成品制备成Sabin IPV成品疫苗，其质量稳定，安全性及免疫原性良好，经检定全部符合国家生物制品规程的要求。

主权项

1、一种减毒株脊髓灰质炎灭活疫苗后处理方法，其特征在于采用下列工艺步骤：1)、澄清：将大规模培养出来的病毒液经过1.0-0.6μm、0.6-0.45μm、0.45-0.22μm孔径的三级滤柱过滤、澄清，去除病毒液中的细胞碎片及杂质，并保持病毒液的无菌状态；2)、浓缩：将澄清过的病毒液，用10万截留分子量的超滤膜将病毒液浓缩200～400倍。3)、纯化：a、凝胶过滤：浓缩的病毒液用层析柱纯化，即用80mmol/L磷酸盐缓冲液洗脱，缓冲液pH7.0-7.2，紫外吸收波长280测吸收值，收集第一峰即为凝胶过滤纯化的病毒液；B、离子交换：凝胶过滤纯化的病毒液用层析柱纯化，即用80mmol/L磷酸盐缓冲液洗脱，缓冲液pH7.0-7.2，紫外吸收波长280测吸收值，收集第一峰即为纯化的病毒液；4)、除菌过滤：纯化的病毒液用0.22μm的滤膜除菌过滤，之后加入10倍浓缩M199，使病毒液中含有原倍的M199；5)、灭活：在过滤的病毒液中，按终浓度为1/4000加入福尔马林灭活剂，在35-37℃温度下灭活12-14天，每天取样观察，灭活至第6天时，将病毒液用0.22μm滤膜过滤至另一无菌瓶中，继续灭活至12-14天，转入4℃保存，即为单价半成品。