| 摘要 |
A találmány tárgya egy eljárás rekombináns humán eritropoietin (rhEpo)kinyerésére és tisztítására gazdasejteket tartalmazó sejttenyésztőtápközegből, amely abban áll, hogy (a) eltávolítják a gazdasejteket, asejtes alkotórészeket és a sejttörmeléket a sejttenyésztő tápközegbőla következő eljárások valamelyikével: (i) centrifugálással és eztkövető <depth' szűrési lépéssel, (ii) <depth' szűrési lépéssel vagy(iii) centrifugálással, hogy tisztított tenyésztőközeg-felülúszótkapjanak; (b) beállítják a felülúszó vezetőképességét 5 mS/cm vagyennél kisebb értékre és a pH-ját körülbelül 7,0 és 8,0 közöttiértékre; (c) a (b) lépésben kapott felülúszót felviszik egy oszlopra,amely anioncserélő kromatográfiás közeget tartalmaz, az oszlopotmossák, eluálják az rhEpo-t az oszlopról, és összegyűjtik az rhEpo-ttartalmazó csúcsfrakció(ka)t: (d) a (c) lépésből származó egyesítettcsúcsfrakciókat revertfázisú kromatográfiás lépésnek vetik alá olyangyanta alkalmazásával, amely közepes nyomáson (i bar) futtatható és aNaOH magas koncentrációira rezisztens, az rhEpa-t egy szerves oldószerlineáris gradiensével eluálják; (e) a (d) lépésben eluált egy vagytöbb, rhEpo-t tartalmazó frakciót felviszik egy oszlopra, amelyanioncserélő kromatográfiás közeget tartalmaz, az oszlopot mossák ésaz rhEpo-t egy lineáris sógradienssel segítségével eluálják; (f) az(e) lépésben eluált egy vagy több.; rhEpo-t tartalmazó frakciótszelektálják az rhEpo szalilácójának foka alapján; és (g) az (f)lépésben eluált egy vagy több, rhEpo-t tartalmazó frakciót alávetikegy vagy több méretkizárásos kromatográfiás lépésnek gélszűréses közegsegítségével, hogy eltávolítsák a potenciális dimereket és nagyobbaggregátumokat; és összegyűjtik az rhEpo-t tartalmazó eluátumot. Atalálmány szerinti eljárással meghatározott glikoforma összetételű,igen nagy tisztaságú rhEpo állítható elő. Ó |
