农药速灭威残留量检测方法

摘要

本发明速灭威(metolcarb)ELISA检测方法属于农药残留分析及农产品安全检测范畴。检测方程为Logit(B/Bo)=－0.9404LogC+1.5146(其中B为样品孔吸光值，Bo为阳性对照吸光值，C为板孔中测出的速灭威浓度)，检测条件为：速灭威包被抗原HOM－OVA 0.6μg/ml在微量分析板中每孔加 50μl，速灭威抗血清稀释20000倍作为工作浓度，1％明胶作封闭物，抗原抗体反应基质(PBST)中甲醇含量为5％、pH值为7.4、离子强度为3.2mol/L，本方法具较强的特异性、灵敏性及稳定性，为速灭威超微量检测提供了快速、灵敏、特异的技术方法。

主权项

1、农药速灭威残留量ELISA检测方法，包括：1)速灭威多克隆抗体制备：采用速灭威人工抗原的免疫原HOM-BSA，常规免疫方法免疫新西兰白兔，制备得到抗速灭威的兔多克隆抗体抗血清；2)包被：采用速灭威人工抗原的包被抗原HOM-OVA 0.6μg/ml在微量分析板中每孔加50μl，4℃冰箱过夜，倒净，以常规洗涤缓冲液PBST洗涤3～6次并倒置、在吸水纸上拍干；3)封闭：1％明胶作封闭物，微量分析板每孔100μl，37℃反应2小时，倒净，以常规洗涤缓冲液PBST洗涤3～6次并倒置、在吸水纸上拍干；4)加抗体及抗体与待测样品的混合液：用稀释10000倍的速灭威抗血清与待测样品和空白抗原抗体反应基质PBST液等体积充分混合，后以每孔50μl加到微量分析板中，37℃反应1小时，倒净，以常规洗涤缓冲液PBST洗涤3～6次并倒置、在吸水纸上拍干；5)加酶标二抗：用pH7.4、0.15mol/L的常规洗涤缓冲液PBST将商品化的HRP-羊抗兔IgG稀释2000倍，微量分析板每孔加50μl，37℃反应1小时，倒净，以常规洗涤缓冲液PBST洗涤3～6次并倒置、在吸水纸上拍干；6)显色：TMB底物溶液50μl/孔，37℃显色反应10分钟7)终止反应并读数加2mol/L的硫酸，50μl/孔终止显色反应，酶联仪上450nm处读出吸光值，空白基质作阳性对照吸光值Bo，待测样品吸光值B；8)数据处理计算出结合率B/Bo及Logit(B/Bo)，Logit(B/Bo)＝Ln[(B/Bo)/(1-B/Bo)] 公式1代入如下检测方程：Logit(B/Bo)＝-0.9404LogC+1.5146 公式2其中C为微量分析板孔中测得的速灭威浓度，通过公式1和公式2可以求得；X＝n·2C，n为反应前样品被稀释的倍数 公式3待测样品中以浓度X表示的速灭威残留量可通过公式3求得。