鲟科鱼类精子超低温冷冻保存方法

摘要

鲟科鱼类精子超低温冷冻保存方法，涉及鱼类精子保存方法，本发明要解决保存鲟科鱼类精子有较高活率的方法。本发明配备冰点渗透压计、低温生物降温仪与液氮容器，其特征是先测鲟科鱼类精子渗透压，按渗透压配保存液，确定抗冻保护剂及浓度，通过低温生物降温仪测液氮容器准确温度，确立最佳降温温层，将稀释液+DMSO作冷冻保护液，精子与保护液按3∶1稀释，在低温下平衡处理，当精子渗透压最适保存时，装入离心管，通过低温生物降温仪降至－5℃C平衡10min，然后投入160～－180℃液氮蒸汽中平衡20min，再放入液氮中保存；解冻时从－196℃提升到－160～－180℃平衡处理20min，再在38～40℃水浴中解冻。本发明用于水产养殖。

主权项

鲟科鱼类精子超低温冷冻保存方法配备冰点渗透压计、低温生物降温仪与液氮容器；通过NaCl溶液的间接测定和冰点渗透压计的直接测定，首先测出鲟科鱼类精子的渗透压；按测出精子本身的渗透压值进行精子保存液的配制，精子保存液以NaCl、KCl、葡萄糖配制，NaCl的浓度为0.3～0.75％、KCl的浓度为0.02-0.1％、葡萄糖的浓度为1-1.6％；然后确定鲟科鱼类精子保存的抗冻保护剂种类及浓度，采用DMSO作为抗冻剂，浓度为10～14％；通过低温生物降温仪直接测出液氮容器的准确温度，确立最佳的降温温层；将稀释液+DMSO抗冻剂作为鲟科鱼类精子低温冷冻保护液，精子与保护液的比例按3：1稀释；在2～4℃的低温下平衡处理2～3h，当精子的渗透压提高到最适保存值时，将精子装入2ml的塑料离心管，通过低温生物降温仪，降至-5℃平衡10min，然后投入-160～-180℃液氮蒸汽中平衡20min，再放入液氮中保存；解冻时，将保存的精子从-196℃提升到-160～-180℃温区平衡处理20min，然后再在38～40℃水浴中解冻。