致病性鳗弧菌的PCR快速检测试剂盒及其检测方法

摘要

本发明公开一种致病性鳗弧菌的PCR快速检测试剂盒及其检测方法。本发明的内容包括由缓冲试剂A、细胞裂解试剂B和C、PCR试剂管、Taq酶、普通琼脂糖、溴化乙锭溶液、溴酚蓝上样缓冲溶液组成的PCR检测试剂盒以及一套检测操作程序。本发明突出的优点是建立多重PCR反应，可快速、准确、敏感地检测出样品中的致病性鳗弧菌，为水产养殖动物的疾病诊断提供简单快速准确的方法，也可应用于对养殖水体和饲料的质量监测。

主权项

1.一种致病性鳗弧菌的PCR快速检测试剂盒，其特征是试剂包括：1)DNA提取试剂：含缓冲试剂A、细胞裂解试剂B和C；试剂A：pH为8.0，含有三羟基甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸，它们的浓度分别为10～50mM、1～10mM；试剂B：pH为8.0，含有蛋白酶、三羟基甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸，它们的浓度分别为1～10mg/ml、10～50mM、1～10mM；试剂C：含有十六烷基三甲基溴化胺、氯化钠，浓度分别为1～10g/ml、5～10M；2)PCR试剂管成分为：2.5～5.0μl 10×buffer，2.0～4.0μl dNTP(dATP，dTTP，dCTP，dGTP的混合物，每种浓度2.5mM)，25mM 2.0～4.0μl MgCl2，引物对10μM 0.5～1μl引物1和10μM 0.5～1μl引物2，引物对20μM 0.5～1μl引物3和20μM 0.5～1μl引物4，14～31μl灭菌去离子水；3)Taq酶5～10μl，3U/μl；4)普通琼脂糖1～1.2g，可配制成1～1.2％的使用浓度；5)5～10μg/μl溴化乙锭溶液0.5～1.0ml，可配制成为0.5～1.0μg/ml的使用浓度；6)0.25～0.75％(g/ml)溴酚蓝上样缓冲液30～100μl。