鸡骨骼肌表达序列标签基因芯片的制备方法

摘要

鸡骨骼肌表达序列标签基因芯片的制备方法，涉及生物技术领域。现有的cDNA芯片的制备方法存在成本高、玻璃片修饰基团不稳定等缺点。本发明的制备过程包括初步处理DNA、点样前处理DNA、点样、制备等过程，通过上述过程即得本发明所述基因芯片。本发明的制备方法具有以下优点：1.规模大：可以同时对10000个以上的基因进行检测；2.速度快：芯片的杂交反应可以在几个小时内完成；3.效率高；4.安全性高：避免了同位素等物质的污染；5.灵敏度高：可检测丰度差几个数量级的表达情况；6.相对成本低；因此，cDNA芯片技术具有其他方法不可比拟的优势，能够胜任蛋鸡和肉鸡的骨骼肌差异表达基因的大规模分析。

主权项

1、一种鸡骨骼肌表达序列标签基因芯片的制备方法，其特征在于它的制备过程如下：(1)初步处理DNA：a.将5～10μg已纯化提取的DNA溶解于50μl的0.1～0.15M NaOH溶液中，并在60～70℃温度下水浴30～60分钟；b.加入5μl的溶于异丙醇的0.1～0.2M环氧丙氧基三甲氧基硅烷；c.在60～70℃水浴锅中水浴3～5个小时；d.加50μl中和液，中和液为0.2M Tris.HCl和1M NaCl的混合液；e.加入200μl的乙醇进行纯化回收，即完成了DNA的初步处理；(2)点样前处理DNA：将初步处理的DNA加入25μl 45～55mM NaOH溶液中进行变性，在所得液体中再加25μl 0.08-0.12M的Tris HCl即完成处理；(3)点样：将产物取体积10μl，然后通过8道加样器，将样品转移至Axygen的384孔板，然后利用MicroGridII机器人进行cDNA芯片制备：使用的点样针为0.1mm的实心针，载体为玻璃片，利用4×4的针列进行点样，控制芯片制备外部环境，温度保持在21℃，相对湿度控制在50-55％之间，并使用软接触(softtouch)的功能，严格控制点样针每次取样之间的洗针程序；(4)点样完成后，立刻将玻片放在80℃温度下干烤2～4小时；取出玻片，在浓度为80％的乙醇中浸泡，然后将玻片用保鲜膜包住使其密封，再在60-70℃的水浴锅中水浴4～8小时；用体积浓度为80％的乙醇清洗至其表面杂质清除；用气流吹干或用550rpm离心机离心3min，即得本发明所述芯片。