人表皮干细胞的分离与培养方法

摘要

本发明属生物细胞技术领域，涉及一种人表皮干细胞的分离与培养方法。方法特征包括：细胞外基质覆盖平皿的预备；表皮细胞的分离；滋养层细胞的制备；表皮干细胞的筛选及培养。目前用该法在体外已稳定培养传代超过120PD，经体内外实验证实该细胞无致瘤性，具有强的增殖能力，并可以形成成熟的全层分化表皮，为有关表皮干细胞在科研、教学及临床的应用起到不可估量的作用，同时孕育着巨大的社会效益和经济效益。

主权项

1.一种人表皮干细胞的分离及体外培养方法，包括有细胞外基质覆盖平皿的预备，表皮细胞的分离，滋养层细胞的制备，表皮干细胞的筛选及培养。所述细胞外基质、表皮干细胞中所需的表皮细胞以及用作滋养层细胞的成纤维细胞都来源于同一个体皮肤；表皮细胞是将所得皮肤用酶消化和机械分离方法获得，其特征在于：所述细胞外基质覆盖平皿预备的步骤为：将表皮细胞接种入平皿内，培养至汇合，换液加入乙二胺四乙酸EDTA和三羟甲基氨基甲烷盐酸和曲拉通混合液孵育；再换液加入变性的牛血清白蛋白孵育60-90分钟，清洗后备用；所述滋养层细胞制备的步骤为：取同一个体皮肤的成纤维细胞培养至汇合，加丝裂霉素C孵育；所述表皮干细胞的筛选及培养具体步骤为：预备好的覆盖有细胞外基质的平皿中，加入表皮细胞悬液，孵育后吸弃液体，用磷酸盐缓冲液清洗，贴壁细胞为表皮干细胞；用滋养层细胞和KSC培养液进行培养；用胰酶/EDTA混合液消化传代。