万带兰的无菌播种和组织培养技术

摘要

本发明涉及万带兰的无菌播种和组织培养技术。万带兰(Vanda)，又名万代兰，与卡特兰、石斛兰、蝴蝶兰一起被称为“四大观赏兰花”之一。万带兰的常规繁殖方法有分蘖和扦插等，但繁殖速度慢，而万带兰种子由于胚发育不完全，自然状态下极难萌发。因此，无论是杂交育种还是原生种的繁殖，采用无菌播种是最有效的繁殖方法之一。本发明采用人工营养基利用无菌播种的方法能获得大量试管苗，并利用无菌实生苗的茎尖或茎节能进行丛生芽的增殖并通过生根培养能形成完整植株。本发明提供万带兰的无菌播种和组织培养繁殖的方法及所使用的培养基，可操作性强，应用价值高。

主权项

1、一种万带兰的无菌播种和组织培养技术，其特征在于该技术包括以下步骤：1)、材料：采用大花万带兰和鸟舌兰为亲本，开花时选取生长健壮的母株进行大花万带兰的自交授粉及其进行大花万带兰和鸟舌兰杂交，授粉后果实120-150天成熟时，做为外植体用于播种；2)、无菌播种：取基本成熟的果实，用75％的酒精浸泡30秒后置于0.1％的升汞溶液中消毒20分钟，无菌水冲洗4～5次后切开果实，用接种针将白色粉末状种子接种到种子萌发培养基中30-40天胚萌发，60天形成完整植；当培养基中无菌实生菌太密而实生苗较小时，可在相同的培养基上进行壮苗培养；培养温度26±2℃，光照度1500～2000lx，光照12小时/天；3)、丛生芽增殖：为获得更多的种苗，利用无菌实生苗的茎尖或茎节培养在增殖培养基上能形成丛生芽，丛生芽在相同的培养基上能进行继代增殖。培养温度26±2℃，光照度1500～2000lx，光照12小时/天；4)、生根壮苗：将播种形成的植株或继代增殖得到的丛生芽切割成单个芽，接种在生根培养基上进行生根培养；40天能形成株高3-4厘米的完整植株；培养温度26±2℃，光照度1500～2000lx，光照12小时/天；5)、试管苗移栽：当试管苗能长至3-4厘米高时，转移到自然光下炼苗7-14天，然后将其从玻璃瓶中取出，洗净根部的培养基，移入泥炭和粗椰壳的混合基质中，保持适当通风和足够的湿度。