发明名称 | 凝血酶分离纯化方法 | ||
摘要 | 一种凝血酶分离纯化方法,首先取动物血液为原材料,将此血液加入柠檬酸钠溶液作为抗凝剂;离心分离获得血浆;经冷冻、解冻,再次离心获得上清液;在上清液中加入BaCl<SUB>2</SUB>离心收集沉淀物;在此沉淀物中加入EDTA溶液解吸附,再次离心弃去沉淀,获得凝血酶原粗液;室温下向凝血酶原粗液中加入CaCl<SUB>2</SUB>溶液使凝血酶原粗液浓度达到0.1mol/l,再经DEAE——纤维素阴离子交换柱层析获得凝血酶纯品,冷冻干燥得到凝血酶成品。本发明通过将血浆冷冻,低温解冻先有效地去除了部分纤维蛋白原,提高了凝血酶的得率,通过优化离子交换层析获得高纯度的凝血酶,其比活力为1500U/mg蛋白,得率为0.4‰。 | ||
申请公布号 | CN1587400A | 申请公布日期 | 2005.03.02 |
申请号 | CN200410073056.6 | 申请日期 | 2004.09.08 |
申请人 | 陕西科技大学 | 发明人 | 马永征;李敏康;宋宏新;王旭 |
分类号 | C12N9/74 | 主分类号 | C12N9/74 |
代理机构 | 西安通大专利代理有限责任公司 | 代理人 | 徐文权 |
主权项 | 一种凝血酶分离纯化方法,其特征在于:1)首先取动物血液为原材料,在此血液中按9∶1的体积比加入质量百分比浓度为3.8%的柠檬酸钠溶液作为抗凝剂;2)在4℃以2500~3000转/分钟的离心力下离心5~10分钟分离获得血浆;3)将此血浆在-20~-30℃冷冻1~3天后,2~4℃解冻,在4℃以2500~3000转/分钟的离心力下离心5~10分钟分离获得上清液;4)在每升上清液中加入80~120ml的浓度为1mol/l的BaCl2溶液,在4℃以3500~4000转/分钟的离心力离心5~10分钟收集沉淀物;5)在此沉淀物中加入pH值为7.4的0.2mol/l的EDTA溶液解吸附,在4℃下以3500~4000转/分钟的离心力离心5~10分钟弃去沉淀,获得凝血酶原粗液;6)室温下向凝血酶原粗液中加入CaCl2溶液使凝血酶原粗液浓度达到0.1mol/l,再经DEAE——纤维素阴离子交换柱层析获得凝血酶纯品,冷冻干燥得到凝血酶成品。 | ||
地址 | 712081陕西省咸阳市人民西路49号 |