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1，一种板式链亲和素固相双位点夹心一步法试剂盒，其特征是，在酶联免疫吸附分析试剂盒基础上，通过链亲和素—生物素捕获系统将抗体、抗原或免疫复合物间接地固定于固相上，建立板式链亲和素固相双位点夹心一步法试剂盒，其中，所述板式链亲和素固相双位点夹心一步法采用酸处理方法，用链亲和素预包被酶标板，生物素标记抗cTnI单克隆抗体，辣根过氧化物酶标记另一株抗cTnI单克隆抗体；具体制备步骤：第一，链亲和素固相的制备：取50μl、1mg/ml链亲和素加入200μl蒸馏水稀释，再加50μl 3mol/l醋酸，室温放置5分种，用2mol/l Tris调至pH6.0，然后用0.05mol/l，pH9.5碳酸缓冲液稀释成2μg/ml，加入聚苯乙烯酶联免疫吸附分析微孔板，120μl/孔4℃过夜，洗涤液洗3次，加入0.5％BSA、0.02mol/l、pH7.2 PBS封闭液，37℃、1小时，弃去封闭液，吹干备用；第二，生物素化抗体的制备：单克隆抗体腹水提纯采用辛酸法，生物素标记单克隆抗体1mg/ml抗体溶液中以1∶100摩尔数之比加入NHS-LC-生物素，混匀后室温放置2小时，装入透析袋，对0.02mol/l、pH7.2 PBS透析48小时，加入等体积甘油，在-20℃储存备用；第三，酶标记抗体的制备：辣根过氧化物酶5mg溶于0.5ml双蒸水中，加0.06mol/l过碘酸钠0.5ml、4℃反应30分钟，再加入0.16mol/l乙二醇室温反应30分钟后，与1ml浓度为2mg/ml的抗体溶液混合，对0.05mol/l，pH9.5的碳酸缓冲液4℃透析过夜，透析物与0.2ml，0.5％的四氢硼酸钠4℃反应2小时，加等量饱和硫酸铵4℃搅拌30分钟，1000g离心15分钟，沉淀溶于pH7.4、0.02mol/l PBS中，对同样缓冲液透析过夜，加稳定剂-30℃保存。 |
