羟基磷灰石复性及同时纯化基因重组蛋白质的方法

摘要

一种羟基磷灰石复性及同时纯化基因重组蛋白质的方法。其特点是选用对变性蛋白有强的吸附能力而对变性剂和还原剂的吸附能力较弱的羟基磷灰石作为填料，用高浓度变性剂防止蛋白在管道和柱头处的沉淀。用适当的洗脱方法将蛋白、变性剂和还原剂分离，实现蛋白的折叠复性，同时将目的蛋白和杂蛋白分离，提高了活性回收率，目的蛋白纯度达到90％。

主权项

1、羟基磷灰石复性及同时纯化基因重组蛋白质的方法，其特征在于：(1)选用对变性蛋白有强的吸附能力而对变性剂和还原剂的吸附能力较弱的羟基磷灰石作为填料，用高浓度变性剂4～8mol/L脲，防止蛋白在管道和柱头处的沉淀，用洗脱方法将蛋白与变性剂和还原剂分离，实现蛋白的折叠复性；同时将目的蛋白和杂蛋白分离，实现目的蛋白的纯化，(2)洗脱变性剂、还原剂常用变性剂为盐酸胍和脲、还原剂为二硫苏糖醇，与羟基磷灰石结合力较弱，可用去离子水或低浓度盐溶液如0～0.05mol/L的含有Na+、NH4+、K+、Ca2+、Mg2+阳离子的盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐、柠檬酸盐、醋酸盐溶液将其洗脱，(3)洗脱蛋白质羟基磷灰石对蛋白的吸附作用类似于离子交换剂，可用pH＞5的浓度较高的盐如0.1～3mol/L，含有Na+、NH4+、K+、Ca2+、Mg2+阳离子的盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐、柠檬酸盐、醋酸盐溶液，线性梯度或阶梯梯度分别洗脱杂蛋白和目的蛋白，(4)柱子再生目的蛋白洗脱后，用上述高浓度盐或0.5～1mol/L的氢氧化钠将所有杂蛋白完全洗脱，然后再用去离子水或低离子浓度盐溶液平衡柱子，至少5个柱床体积。