| 主权项 |
1.一种用于由卵黄选择性地分离抗体异构物之方 法,其包含下述步骤: (i)由雌禽卵得到一卵黄之水性部分分离物; (ii)藉由以具有一第一浓度之第一非变性盐来盐析 步骤(i)之水性部分分离物,而从该水性部分分离物 中得到一抗体之第一异构物之主要部分;和 (iii)藉由以具有一第二浓度之第二非变性盐来调 整步骤(ii)中所得之水性部分分离物,而从步骤(ii) 中所得之水性部分分离物中盐析出该抗体之第二 异构物之主要部分; 但当该第一非变性盐和该第二非变性盐相同时,该 第一和第二浓度是不同的;其中该第一和第二非变 性盐系分别择自下列群组:NaCl、Na2SO4、(NH4)2SO4、 KCl、CaCl2和MgSO4。 2.如申请专利范围第1项之方法,其中当该第一和第 二非变性盐是相同时,该第二浓度是高于该第一浓 度。 3.如申请专利范围第1项之方法,其中当(NH4)2SO4被用 作为唯一的非变性盐时,该第一浓度系以在步骤(ii )中被处理之该水性部分分离物之体积为基准而不 高于约21%(w/v),以及该第二浓度系以在步骤(iii)中 被处理之所得水性部分分离物之体积为基准而为 约31%(w/v)。 4.如申请专利范围第1项之方法,其中当(NH4)2SO4被用 作为该第一非变性盐时,该第一浓度系以步骤(ii) 中被处理之该水性部分分离物之体积为基准而不 高于约21%(w/v),以及当Na2SO4被用作为该第二非变性 盐时,该第二浓度系藉由添加以步骤(iii)中被处理 之该水性部分分离物之体积为基准而为约16%(w/v) 之Na2SO4来达成。 5.如申请专利范围第1项之方法,其中该抗体之第一 异构物是IgY,以及该抗体之第二异构物是IgY(Fc) 。 6.如申请专利范围第1项之方法,其中该步骤(i)之水 性部分分离物得自于包含下列步骤之前处理: (a)由雌禽卵之卵黄中移除非水性生物分子和颗粒, 藉此得到一含有卵黄抗体之水可混溶部分分离物; (b)令该水可混溶部分分离物流经一含有有效量之 不溶于水且无电价之吸附剂的固定相,该吸附剂能 够吸收平常存在于卵黄中的水可混溶脂质物质;和 (c)收集流经固定相之溶液以供用作为该水性部分 分离物; 其中该吸附剂系择自下列群组: 雾尘化矽粉、非晶矽、二氧化矽、矽胶、矽酸盐 、矽藻土、漂白土、滑石、铝土、活性碳、氧化 铝、二氧化钛和具有物理地吸收脂质之能力的其 他合成或天然黏土。 7.如申请专利范围第6项之方法,其中该移除步骤(a) 包括以一有效量之一稀释剂来稀释该卵黄,该稀释 剂系择自于由一液态缓冲液和水所构成之群组中, 以及继之令所得之经稀释卵黄接受分离处理,藉此 移除该非水性生物分子和颗粒。 8.如申请专利范围第7项之方法,其中该有效量之稀 释剂系以每一份卵黄体积的5份到30份为范围。 9.如申请专利范围第6项之方法,其中该吸附剂系择 自于由雾尘化矽粉、二氧化矽和矽藻土所构成之 群组中。 10.如申请专利范围第6项之方法,其进一步包含冲 提该固定相以得到一供用作为该水性部分分离物 之冲提物的步骤。 11.如申请专利范围第10项之方法,其中该冲提物是 藉洗脱盐而从该固定相冲提出。 12.如申请专利范围第11项之方法,其中该洗脱盐系 择自于由4M呱呢啶-氢氯酸和1-3M硫氰酸钠所构成之 群组。 13.如申请专利范围第10项之方法,其中该冲提物是 在pH値低于4或高于8时自该固定相被冲提出。 14.如申请专利范围第1项之方法,其接续以一或多 个择自下列群组之纯化步骤:尺寸区别层析法、厌 水交互作用层析法、离子交换层析法和免疫亲和 层析法。 15.如申请专利范围第14项之方法,其中该纯化步骤 是免疫亲和层析法。 16.如申请专利范围第15项之方法,其中该免疫亲和 层析法是在pH4-7和低于50mM之离子强度下进行。 17.如申请专利范围第16项之方法,其中该免疫亲和 层析法是在pH5.6-5.8之间进行。 18.如申请专利范围第1项之方法,其中该卵黄是是 得自于被一选定抗原所免疫之雌禽的卵。 19.如申请专利范围第18项之方法,其中该雌禽是一 雁形目的鸟类。 20.如申请专利范围第19项之方法,其中该雌禽是一 鸭子。 21.一种用于由卵黄分离卵黄抗体之方法,其包含下 列步骤: (a)由雌禽卵之卵黄中移除非水性生物分子和颗粒, 藉此得到一含有卵黄抗体之水可混溶部分分离物; (b)令该水可混溶部分分离物流经一含有一有效量 之不溶于水且无电价之吸附剂的固定相,该吸附剂 能够吸收平常存在于卵黄中的水可混溶脂质物质, 并收集流经该固定相之溶液;和 (c)由步骤(b)之该流经溶液中回收该等卵黄抗体; 其中该吸附剂系择自下列群组: 雾尘化矽粉、非晶矽、二氧化矽、矽胶、矽酸盐 、矽藻土、漂白土、滑石、铝土、活性碳、氧化 铝、二氧化钛和具有物理地吸收脂质之能力的其 他合成或天然黏土。 22.如申请专利范围第21项之方法,其中该移除步骤( a)包括以一有效量之一稀释剂来稀释该卵黄,该稀 释剂系择自于由一液态缓冲液和水所构成之群组 中,以及继之令所得之经稀释卵黄接受分离处理, 藉此移除该非水性生物分子和颗粒。 23.如申请专利范围第22项之方法,其中该有效量之 稀释剂系以每一份卵黄体积的5份到30份为范围。 24.如申请专利范围第21项之方法,其中该吸附剂是 矽藻土。 25.如申请专利范围第21项之方法,其中步骤(d)包括 下述次步骤: (i)藉由以具有一第一浓度之第一非变性盐来盐析 步骤(c)之流经溶液,而从步骤(c)之流经溶液中得到 一抗体之第一异构物之主要部分;和 (ii)藉由以具有一第二浓度之第二非变性盐来调整 步骤(i)中所得之产物,而从步骤(i)中所得之产物中 盐析出该抗体之第二异构物之主要部分; 但当该第一非变性盐和该第二非变性盐相同时,该 第一和第二浓度是不同的; 其中该第一和第二非变性盐系分别择自下列群组: NaCl、Na2SO4、(NH4)2SO4、KCl、CaCl2和MgSO4。 26.如申请专利范围第25项之方法,其中当该第一和 第二非变性盐是相同时,该第二浓度是高于该第一 浓度。 27.如申请专利范围第25项之方法,其中当(NH4)2SO4被 用作为唯一的非变性盐时,该第一浓度系以在步骤 (i)中被处理之该流经溶液之体积为基准而不高于 约21%(w/v),以及该第二浓度系以在步骤(ii)中被处理 之所得产物之体积为基准而为约31%(w/v)。 28.如申请专利范围第26项之方法,其中当(NH4)2SO4被 用作为该第一非变性盐时,该第一浓度系以步骤(i) 中被处理之该流经溶液之体积为基准而不高于约 21%(w/v),以及当Na2SO4被用作为该第二非变性盐时,该 第二浓度系藉由添加以步骤(ii)中被处理之该产物 之体积为基准而为约16%(w/v)之Na2SO4来达成。 29.如申请专利范围第25项之方法,其中该抗体之第 一异构物是IgY和该抗体之第二异构物是IgY(Fc)。 30.如申请专利范围第21项之方法,其接续以至少一 个择自下列群组之纯化步骤:尺寸区别层析法、厌 水交互作用层析法、离子交换层析法和免疫亲和 层析法。 31.如申请专利范围第30项之方法,其中该至少一个 纯化步骤是免疫亲和层析法。 32.如申请专利范围第31项之方法,其中该免疫亲和 层析法是在pH4-7和50mM之离子强度下进行。 33.如申请专利范围第32项之方法,其中该免疫亲和 层析法是在pH5.6-5.8之间进行。 34.如申请专利范围第21项之方法,其中该雌禽是被 一选定抗原所免疫之雁形目鸟类。 35.如申请专利范围第34项之方法,其中该雌禽是一 鸭子。 36.一种用于由卵黄分离卵黄抗体之方法,其包含下 列步骤: (a)由雌禽卵之卵黄中移除非水性生物分子和颗粒, 藉此得到一含有卵黄抗体之水可混溶部分分离物; (b)令该水可混溶部分分离物流经一含有一有效量 之不溶于水且无电价之吸附剂的固定相,该吸附剂 能够吸收平常存在于卵黄中的水可混溶脂质物质; (c)冲提该固定相以得到一冲提物; (d)由步骤(c)之该冲提物中回收该等卵黄抗体; 其中该吸附剂系择自下列群组: 雾尘化矽粉、非晶矽、二氧化矽、矽胶、矽酸盐 、矽藻土、漂白土、滑石、铝土、活性碳、氧化 铝、二氧化钛和具有物理地吸收脂质之能力的其 他合成或天然黏土。 37.如申请专利范围第36项之方法,其中该移除步骤( a)包括以一有效量之一稀释剂来稀释该卵黄,该稀 释剂系择自于由一液态缓冲液和水所构成之群组 中,以及继之令所得之经稀释卵黄接受分离处理, 藉此移除该非水性生物分子和颗粒。 38.如申请专利范围第37项之方法,其中该有效量之 稀释剂系以每一份卵黄体积的5份到30份为范围。 39.如申请专利范围第36项之方法,其中该吸附剂系 择自于由雾尘化矽粉和二氧化矽所构成之群组中 。 40.如申请专利范围第39项之方法,其中在步骤(c)中, 该等卵黄抗体是藉由一洗脱剂或在pH値低于4或高 于8时,自该固定相冲提出。 41.如申请专利范围第40项之方法,其中该洗脱盐系 择自于由4M呱呢啶-氢氯酸和1-3M硫氰酸钠所构成之 群组中。 42.如申请专利范围第36项之方法,其中步骤(c)包括 下述次步骤: (iii)藉由以具有一第一浓度之第一非变性盐来盐 析步骤(c)之冲提物,而从步骤(c)之冲提物中得到一 抗体之第一异构物之主要部分;和 (iv)藉由以具有一第二浓度之第二非变性盐来调整 步骤(i)中所得之产物,而从步骤(i)中所得之产物中 盐析出该抗体之第二异构物之主要部分; 但当该第一非变性盐和该第二非变性盐是相同时, 该第一和第二浓度是不同的; 其中该第一和第二非变性盐系分别择自下列群组: NaCl、Na2SO4、(NH4)2SO4、KCl、CaCl2.和MgSO4。 43.如申请专利范围第42项之方法,其中当该第一和 第二非变性盐是相同时,该第二浓度是高于该第一 浓度。 44.如申请专利范围第42项之方法,其中当(NH4)2SO4被 用作为唯一的非变性盐时,该第一浓度系以在步骤 (i)中被处理之该冲提物之体积为基准而不高于约 21%(w/v),以及该第二浓度系以在步骤(ii)中被处理之 所得产物之体积为基准而为约31%(w/v)。 45.如申请专利范围第42项之方法,其中当(NH4)2SO4被 用作为该第一非变性盐时,该第一浓度系以步骤(i) 中被处理之该冲提物之体积为基准而不高于约21%( w/v),以及当Na2SO4被用作为该第二非变性盐时,该第 二浓度系藉由添加以步骤(ii)中被处理之该产物之 体积为基准而为约16%(w/v)之Na2SO4来达成。 46.如申请专利范围第42项之方法,其中该抗体之第 一异构物是IgY和该抗体之第二异构物是IgY(Fc)。 47.如申请专利范围第36项之方法,其接续以至少一 个择自下列群组中之纯化步骤:尺寸区别层析法、 厌水交互作用层析法、离子交换层析法和免疫亲 和层析法。 48.如申请专利范围第47项之方法,其中该至少一个 纯化步骤是免疫亲和层析法。 49.如申请专利范围第48项之方法,其中该免疫亲和 层析法是在pH4-7和离子键能低于50mM之离子强度下 进行。 50.如申请专利范围第49项之方法,其中该免疫亲和 层析法是在pH5.6-5.8之间进行。 51.如申请专利范围第36项之方法,其中该雌禽是被 一选择抗原所免疫之雁形目鸟类。 52.如申请专利范围第51项之方法,其中该雌禽是一 鸭子。 53.一种实质上不含有FC-对等区域之IgY(Fc)抗体, 其系由申请专利范围第1至52项中任一项之方法制 备。 54.一种用以免疫一需此免疫作用之病人的药学组 成物,其包含一抗体以及一药学上可接受的载剂, 该抗体系依据申请专利范围第1-52项中任一项之方 法所得。 55.一种供用于免疫分析之套组,其包含如申请专利 范围第53项之抗体。 56.如申请专利范围第55项之套组,其中该免疫分析 系择自于下列免疫分析法所构成之群组:酵素免疫 分析、比浊免疫分析法(TIA)、颗粒增进式比浊免 疫分析法、单一放射免疫扩散分析法、放射免疫 分析法、浊度测定免疫分析法、化学发光免疫分 析、免疫金分析法、免疫层析分析、西方墨点法( WB)和欧特勒尼(Ouchterlony)法。 图式简单说明: 第1图系显示出一比较四种吸附剂之抗体攫取能力 的SDS-PAGE分析:第1跑道是经部分纯化的抗体萃取物 ;第2跑道是流经2%雾尘化矽粉(fumed silica)之溶液;第 3跑道是流经3%二氧化矽之溶液;第4跑道是流经3% Celite diatomite之溶液;第5跑道是流经3% Celite diatomite hyflo-Cel之溶液;和第6跑道是流经5% Celite diatomite hyflo-Cel之溶液; 第2图系显示出利用雾尘化矽粉当作吸附剂所纯化 出之卵黄抗体在8% SDS-聚丙烯醯胺凝胶上进行电泳 的电泳分析结果:第1跑道是经部分纯化的抗体萃 取物;第2跑道是流经2%雾尘化矽粉之溶液;第3跑道 是源自于该雾尘化矽粉沈淀物之冲提物;第4跑道 是在第一沉淀步骤中以21%(w/v)硫酸铵所沉淀出之 抗体产物;和第5跑道是在第二沉淀步骤中以31%(w/v) 硫酸铵所沉淀出之抗体产物; 第3图系显示出利用Celite diatomite当作吸附剂所纯 化出之卵黄抗体在8% SDS-聚丙烯醯胺凝胶上进行电 泳的电泳分析结果:第1跑道是经部分纯化的抗体 萃取物;第2跑道是Celite diatomite滤出物;第3跑道是 在第一沉淀步骤中以21%(w/v)硫酸铵所沉淀出之抗 体产物;第4跑道是在第二沉淀步骤中以31%(w/v)硫酸 铵所沉淀出之抗体产物;和第5跑道是在第二沉淀 步骤中以16%(w/v)硫酸钠所沉淀出之抗体产物;以及 第4图系显示出利用雾尘化矽粉当作吸附剂所纯化 出之卵黄抗体在8% SDS-聚丙烯醯胺凝胶上进行电泳 的电泳分析结果:M表示分子量标记物;第1跑道是经 部分纯化的抗体萃取物;第2跑道是流经2%雾尘化矽 粉之溶液;第3跑道是源自于该雾尘化矽粉沈淀物 之冲提物;第4跑道是以21%(w/v)硫酸铵所沉淀出之抗 体产物;和第5跑道是经亲和层析法所纯化出之抗 体产物。 |
