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1、一种葛仙米多糖的提取方法，包括如下步骤：A、培养液的配制：配制培养基时，按以下顺序加入：每升水加入硝酸钠0.8-2.5g、磷酸氢二钾0.02-0.05g、硫酸镁0.06-0.09g、氯化钙0.02-0.05g、柠檬酸0.004-0.008g、柠檬酸铁铵0.004-0.008g、乙二胺四乙酸二钠盐0.001-0.003g、碳酸钠0.01-0.04g，微量元素溶液A50.5-2ml，加入的同时搅匀；B、葛仙米的培养：首先是一级培养，由试管原种接入三角瓶中，通气培养，调节气流在2-3L.min-1，气流经过棉花球进行无菌处理，光强控制在70-80μE.m-2.s-1，温度控制在25-32℃，当培养到5-10天后，转入到二级培养；其次是二级培养，将一级培养所得的培养物接入到培养瓶中，通气培养，调节气流在3-5L.min-1，气流经过棉花球进行无菌处理，光强控制在80-90μE.m-2.s-1，温度控制在25-32℃，当培养到5-10天后，转入到三级培养；第三是三级培养，将二级培养所得的培养物接入到培养瓶中，通气培养，调节气流在4-6L.min-1，气流经过棉花球进行无菌处理，光强控制在80-100μE.m-2.s-1，温度控制在25-32℃，当培养到5-10天后，为继续培养的接种种源；第四是继续培养：采用三级培养后的藻种，接入光生物反应器或跑道式循环培养池，按每升培养液1-2g葛仙米湿重的比例接入到光生物反应器或跑道式循环培养池，进行培养，采用日光灯进行光照，光强控制在80-110μE.m-2.s-1，温度控制在25-32℃，接入光生物反应器时，采用空气充气泵通气，调节气流在4-9L.min-1，在充气泵与光生物反应器之间加入棉花球，以便过滤气流中的细菌和细小颗粒杂质，接入跑道式培养池时，采用叶轮或潜水泵搅动培养基；C葛仙米的收获：将上述继续培养10-20天后的葛仙米经过孔径为0.3-0.7cm的不锈钢筛子过筛，通过不锈钢筛子的葛仙米经过处理后，继续培养；D葛仙米多糖的提取：将新鲜葛仙米研磨，加入8-12倍重量的蒸馏水，搅匀，于高压灭菌锅中1-1.4磅压力下抽提20-30min，12000-15000g离心5-10min，收集上清液，向上清液中加入8-10倍体积的预先冷冻到0-4℃的无水乙醇，静置10-20min，白色絮状沉淀物析出，为葛仙米多糖，12000-15000g离心5-10min收集多糖；E纯化、收获与干燥：首先是纯化，将上述所得粗多糖溶于4-6倍蒸馏水w/v中，用10-15倍w/v0-4℃冷的无水乙醇洗涤；其次是收获，将上述溶液在离心机中12000-15000g离心5-10min，收集沉淀物；第三是干燥，将收集到的多糖沉淀物在-60--110℃下冷冻干燥即得到多糖产品。 |
