微生物交叉抗原的筛选与鉴定方法

摘要

微生物交叉抗原的筛选与鉴定方法，涉及一种高通量筛选和鉴定微生物交叉抗原的方法。用双向电泳法分离微生物蛋白质，再免疫转印，多种抗血清作为第一抗体，酶标抗体为第二抗体，显色后检查其阳性；分析免疫原的交叉程度和范围；免疫原的定性，确定抗原的蛋白质种类。建立了一种采用多种抗血清作为第一抗体的免疫蛋白质组学技术，用于高通量筛选具有交叉免疫原性的蛋白质以作为多价疫苗的候选靶位。根据免疫原的交叉程度和范围，可以确定其作为交叉免疫原的可能性及其作用范围。可迅速确定某种微生物的具有交叉免疫原性的全部蛋白质，高效、快速、经济、实用。其方法具有普遍性，不仅可用于细菌，而且还可用于真菌和病毒等微生物交叉抗原的鉴定。

主权项

1、微生物交叉抗原的筛选与鉴定方法，其特征在于其步骤如下：1)用双向电泳法分离微生物蛋白质：将微生物收集后，按质量比微生物∶超声缓冲液＝1∶2～4加入超声缓冲液，超声波破碎，然后进行双向电泳；2)双向电泳后，进行免疫转印，分别采用多种抗血清作为第一抗体，酶标抗体为第二抗体，用联苯二胺或电化学发光试剂显色，当作为第一抗体的抗血清有2种以上为阳性时，该点即为具有交叉免疫原性的蛋白质；3)再分析这些免疫原的交叉程度和范围，阳性抗血清越多，交叉反应范围越大；阳性显色越强，交叉反应程度越好；4)免疫原的定性：取出具有交叉免疫原性的全部蛋白质，按常规质谱样品处理方法进行样品制备，然后进行质谱和生物信息分析，以确定抗原的蛋白质种类。