主权项 |
1、白桂木的离体繁殖方法,其特征在于:该方法依次由以下步骤组成:(1)、无菌外植体的获得;以完整植株的茎尖、茎段、叶片为外植体;将茎尖、茎段用自来水冲洗干净后,用70%酒精处理20min,无菌水冲洗3~5次,0.1%升汞处理5~10min,无菌水洗3~5次,茎尖切成长1.5cm切块接种到诱导培养基中;叶片用自来水冲洗干净后,用70%酒精处理30s,无菌水冲洗3~5次,0.1%升汞处理5~8min,无菌水洗3~5次。叶片切成1cm×2cm的切块接种到诱导MS培养基中;接种时间为35天;(2)、芽的诱导;用培养基对(2)步骤中获得的无菌外植体进行培养,产生丛芽,培养基为改良的MS;(3)、芽的增殖;将茎诱导出的直径0.1~0.2cm,高0.3~0.5cm的再生芽切下,接种到培养基中进行继代培养,茎尖开始时基部膨大,颜色开始转为淡黄色,并长出淡黄色到淡绿色的小芽,这些小芽培养20~25天长出绿色叶片,长成直径0.1~0.3cm,高为0.5~1.5cm的从芽;(4)、根的诱导与培养;将生长于继代培养基中的高0.5~1.0cm、带1~2片叶的从芽切成单芽接种到含MS培养基中培养,培养时间为30~50天,诱导出生根苗;(5)、试管苗的移栽;把苗高≥1.5cm的生根苗置于培养室外或即将移栽的荫棚内练苗10~15天,洗净试管苗附着的培养基,种植到河沙∶泥炭土=1∶8的基质,或河沙中,苗床遮荫70~80%,保持空气湿度50~80%以上,温度保持在22~35℃,移栽后每3天喷施1/2MS营养液,每7~10天喷施800~1000倍的百菌清等杀菌剂,移栽后一个月植株长出新根;待苗长出3-4片叶片,高5cm即可移植到营养杯中,基质采用塘泥∶泥炭土∶粗沙=3∶6∶1;杯苗置遮荫40~60%的室外,并逐渐移去遮荫网,新根长出,苗高≥25cm,即可定植; |