一种造血细胞灌注培养方法和装置

摘要

本发明公开了一种造血细胞灌注培养方法和装置。本发明的装置至少包括搅拌式生物反应器和通过管线与搅拌式生物反应器相连通的灌注培养腔。本发明首先进行静态灌注培养，待细胞生长至较高密度后，再转入搅拌式悬浮培养，克服了静态培养中造血细胞生长至高密度后培养环境中存在的浓度梯度问题，而且避免了造血细胞在培养初期受剪切力影响而造成细胞不生长或生长缓慢的问题，培养结果表明，在培养初期，总细胞即有较大扩增，而且CFU－Mix、CFU－GM、CD34⁺细胞也有较大扩增；细胞长至较高密度后，转入反应器中进行搅拌悬浮培养，总细胞进一步扩增，同时CFU－Mix、CFU－GM、CD34+细胞也继续扩增，此方法比直接进行搅拌悬浮培养可获得更高的扩增倍数。

主权项

1.一种造血细胞灌注培养装置，其特征在于，至少包括搅拌式生物反应器(101)和通过管线与搅拌式生物反应器(101)相连通的灌注培养腔(102)；所说的搅拌式生物反应器(101)包括：一个圆柱状上端具有封盖(1)的圆柱状容器(2)，高径比为2～4∶1；一个设置在所述容器(2)中的搅拌装置(3)；一个设置在封盖(1)上的混合气体和酸/碱液入口(4)；一个设置在封盖(1)上的混合气体出口(5)； 一个设置在容器(2)内设有上部出气口(6)和下部出气口(7)并与所说的混合气体出口(5)相连通的通气管(8)；一个设置在封盖(1)上的培养液入口(9)；一个设置在封盖1上的培养液出口10；一个设置在封盖1上的细胞回流入口11；一个通过封盖(1)设置在容器(2)内的pH电极(16)；一个通过封盖(1)设置在容器(2)内的溶氧浓度电极(17)；所说的灌注培养腔(102)为方型管，外带水浴夹套，其尺寸为高0.5-2cm，宽0.5-2cm，长15-30cm；接种口(30)设置在灌注培养腔(102)的一端；培养基入口(31)设置在靠近接种口(30)的灌注培养腔(102)的一端的上部，并通过管线与培养液出口(10)相连通；培养基出口(32)设置在灌注培养腔(102)的另一端的上部，并通过管线与细胞回流入口(11)相连通；回流口(33)设置在灌注培养腔(102)靠近接种口(30)一端的下部，并通过管线与细胞回流入口(11)相连通；废液口(340设置在靠近培养基出口(32)的灌注培养腔(102)的顶端。