分析肽的C－末端氨基酸序列的方法

摘要

本发明提供通过应用反应技术从那里依次释放C－末端氨基酸来分析肽C－末端氨基酸序列的方法，当顺序释放肽的C－末端氨基酸时，该方法可以抑制如在肽中间位置裂解肽键的不希望有的副反应，并允许在广泛适用的条件下进行其化学处理。在按照本发明的方法中，在干燥空气中，在15－60℃范围选择的温度下，使来自包含链烷酸酐和向其中加入的少量全氟链烷酸的混合物的均是汽相的链烷酸酐和全氟链烷酸作用在被检测肽的干燥样品上；由此C－末端氨基酸的释放是由连续形成5－噁唑酮结构，接着裂解5－噁唑酮环产生；然后基于获得的一系列反应产物的分子量减少通过分析鉴定C－末端的氨基酸序列。

主权项

1.一种分析被检验肽的C-末端氨基酸序列的方法，该方法包含以下步骤：通过化学方法从所述肽顺序释放C-末端氨基酸以制备包含其一系列反应产物的混合物，将该系列反应产物和初始肽进行质谱分析以测量与其C-末端氨基酸依次释放相关的分子量的减少，和基于测量的分子量的一系列减少鉴定依次去除的一系列氨基酸，并从C-末端排列鉴定的所述氨基酸以获得所述肽C-末端氨基酸序列的信息，其中在释放C-末端氨基酸的步骤中所用的处理技术是包含下列步骤的方法：在干燥气氛中，在选自15-60℃范围的温度下，使均是汽相的链烷酸酐和全氟链烷酸，其是来自于包含链烷酸酐和向其中加入的少量全氟链烷酸的混合物，作用在被检验的肽的干燥样品上；进行C-末端氨基酸的释放，其与在肽的C-末端形成5-噁唑酮结构接着裂解5-噁唑酮环的过程结合，所述5-噁唑酮结构由下列通式(III)表示：其中R1是肽的C-末端氨基酸的侧链，R2是刚好位于C-末端氨基酸之前的氨基酸残基的侧链。