大豆茎尖转化超声波辅助的外源基因导入方法

摘要

一种大豆茎尖转化超声波辅助的外源基因导入方法，在农杆菌介导BT基因对大豆茎尖转化的过程中，采用了超声波辅助方法，大豆种子经萌发、预培养之后，进行农杆菌感染时辅以超声波侵染处理，再经共培养、不定芽培养及转化芽诱导生根，得到转化植株产生的种子。本发明采用超声波在外植体上制造微小伤口，增加了农杆菌与外植体之间的接触面积，在导入BT基因的过程中起到了很好的效果，明显提高了农杆菌的感染效率，有效的提高了出芽数量和转化苗的数量。

主权项

1、一种大豆茎尖转化超声波辅助的外源基因导入方法，其特征在于包括如 下步骤： 1)大豆种子冲洗后放在70％的酒精中浸泡0.5～1分钟，转入含有饱和次氯酸 钠溶液中浸泡15分钟，用无菌水冲洗后将种子置于无菌水中浸泡18～24小 时，使种子萌发； 2)去种皮，去除子叶，在解剖镜下去除两片原叶，暴露出顶端分生组织区，从 中取出约0.5cm的茎尖，置于MSB+6-BA3.0mg/L培养基上，预培养24 小时； 3)将预培养的茎尖取出，置于100ml的三角瓶中，加入制备好的农杆菌菌液 (OD_600nm≈0.5)，三角瓶浸于功率500W、工作频率50kHz的超声波洗器中， 超声波侵染处理15～20分钟； 4)侵染完毕，将材料取出，用无菌滤纸吸干，放入MSB+6-BA1.0mg/L+IBA0.2 mg/L(PH5.8)培养基中避光培养3天； 5)转入MSB+6-BA0.5mg/L+cb500mg/L(PH5.8液体)连续培养3天，每天换 新鲜培养基； 6)转入MSB+6-BA0.5mg/L+cb500mg/L+KM80mg/L(PH5.8固体)，每2周转 接一次，至不定芽出现伸长到2～3cm； 7)切下外植体上的不定芽并放在1/2MSB+KM50mg/L(PH5.8)培养基上，进行 转化芽诱导生根15～20天，移栽到大盆至获得转化植株产生的种子，其中 1/2MSB为MS培养基中的无机成分减半+B5培养基中的有机成分。