一种改进的肝癌鼠源单克隆抗体的制备方法

摘要

本发明涉及一种改进的肝癌鼠源单克隆抗体的制备方法，本方法以改良型的DXL无血清培养液为培养基质，即在DXL无血清、无蛋白培养液中添加了各种生长因子，如神经细胞生长因子、表皮生长因子、成纤维细胞生长因子或胚胎生长因子等，含量各为0.01－0.1毫克/升。采用填充床式生物反应器高密度杂交瘤细胞连续培养，工艺条件是，温度为30～40℃，转速为300－480RPM，pH为6.8～7.25，PO₂为0.5－1.95巴，PCO₂为0.5－1.95巴，PN₂为0.5－1.95巴，空气流量为0.1－2/小时、压力为2－5巴。其细胞密度高达108/ml，每升培养液的单克隆抗体的得率达到1000－1500mg。

主权项

1.一种改进的肝癌鼠源单克隆抗体的制备方法，其特征在于，以改良型DXL无血清培养液为培养基质，采用填充床式生物反应器，高密度杂交瘤细胞连续培养法继以分离纯化制得，其中：所述改良型DXL无血清培养液是在DXL无血清、无蛋白培养液的基础上，添加了神经细胞生长因子、表皮生长因子、成纤维细胞生长因子或胚胎生长因子中的一种或几种，各种生长因子的含量各为0.01-0.1毫克/升；所述DXL无血清、无蛋白培养液如下：腺嘌呤 0.1-0.5毫克/升丙氨酸 5-10毫克/升氯化铝 0.0005-0.001毫克/升偏钒酸铵 0.0005-0.001毫克/升精氨酸 100-500毫克/升天冬酰胺 10-50毫克/升天冬氨酸 5-30毫克/升氯化钡 0.001-0.005毫克/升生物素 0.05-0.5毫克/升氯化钙 10-100毫克/升氯化胆碱 10-100毫克/升硫酸铬钾 0.0005-0.005毫克/升柠檬酸 10-50毫克/升瓜氨酸 1-10毫克/升氯化钴 0.001-0.005毫克/升硫酸铜 0.001-0.01毫克/升半胱氨酸 10-100毫克/升双亚油酸卵磷脂 0.1-1毫克/升双硬脂酸卵磷脂 0.1-1毫克/升乙醇胺 1-10毫克/升乙二胺四乙酸盐 5-10毫克/升聚乙二醇 0.5-4毫克/升硫酸亚铁 0.5-5毫克/升原子铁 2-5毫克/升黄素腺嘌呤二核苷酸 0.01-0.05毫克/升叶酸 1-5毫克/升二氧化锗 0.0001-0.001毫克/升谷氨酸 10-50毫克/升谷氨酰胺 100-500毫克/升甘氨酸 1-10毫克/升葡萄糖 2000-10000毫克/升组氨酸 10-100毫克/升次黄嘌呤 1-10毫克/升异亮氨酸 100-500毫克/升亮氨酸 100-500毫克/升亚油酸 0.01-0.1毫克/升氯化锂 5-50毫克/升赖氨酸 50-500毫克/升氯化镁 50-500毫克/升氯化锰 0.00005-0.0005毫克/升甲硫氨酸 10-50毫克/升钼酸 0.00005-0.0005毫克/升MOPS 1000-10000毫克/升肌醇 10-50毫克/升烟酰胺 1-10毫克/升硝酸镍 0.0001-0.0005毫克/升鸟氨酸 1-10毫克/升草酰乙酸 1-10毫克/升泛酸 1-5毫克/升酚红 1-10毫克/升苯丙氨酸 10-100毫克/升溴化钾 0.00005-0.0005毫克/升氯化钾 100-500毫克/升碘化钾 0.00005-0.0005毫克/升脯氨酸 10-100毫克/升黄体酮 0.001-0.01毫克/升腐胺 0.1-0.5毫克/升吡哆辛 0.1-0.5毫克/升丙酮酸 100-500毫克/升核黄素 0.01-0.05毫克/升氯化铷 0.000005-0.00005毫克/升丝氨酸 10-100毫克/升氯化银 0.000001-0.0000 1毫克/升氯化钠 5000-10000毫克/升氟化钠 0.001-0.01毫克/升硝普钠 1-10毫克/升磷酸氢二钠 100-1000毫克/升亚硒酸钠 0.01-0.05毫克/升精胺 0.1-1毫克/升氯化亚锡 0.00005-0.0005毫克/升牛磺酸 10-50毫克/升硫辛酸 0.08-0.4毫克/升硫胺素 0.1-0.8毫克/升苏氨酸 8-18毫克/升胸腺嘧啶 0.2-1.5毫克/升氯化钛 0.0005-0.004毫克/升生育素 0.05-4毫克/升色氨酸 1-10毫克/升吐温80 0.05-3毫克/升酪氨酸 25-45毫克/升缬氨酸 70-120毫克/升维生素B12 2-15毫克/升硫酸锌 0.6-5毫克/升。