酿酒酵母重组乙型肝炎病毒表面抗原流加补料发酵工艺

摘要

本发明提供了一种利用啤酒酵母工程菌生产乙肝表面抗原的新方法，该方法包括如下步骤：1)所述啤酒酵母工程菌的种子发酵步骤；2)利用步骤1)制得的种子进行发酵培养的步骤；和3)从步骤2)所得的发酵混合物中分离纯化出乙肝表面抗原的步骤；该方法的特征在于，在上述在步骤2)中以腺嘌呤的重量计，以低于14mg/升·小时的速率向培养基中流加腺嘌呤、腺苷、腺苷一磷酸、腺苷二磷酸或腺苷三磷酸。本发明的方法可显著提高提高重组HBsAg表达水平。

主权项

1.一种利用啤酒酵母工程菌生产乙肝表面抗原的方法，其中所述的啤酒酵母工程菌株的受体菌是腺嘌呤、亮氨酸营养缺陷型的；所述的啤酒酵母工程菌包含重组2μ质粒但不含天然的2μ质粒；所述重组2μ质粒包含编码乙肝表面抗原的基因，该基因的5’端和3’端分别与3-磷酸甘油醛脱氢酶启动子和乙醇脱氢酶终止子可操作连接；所述重组2μ质粒还包含编码亮氨酸的基因，该基因的5’端和3’端分别与启动子和终止子可操作连接；该方法包括如下步骤：1)所述啤酒酵母工程菌的种子发酵步骤；2)利用步骤1)制得的种子进行发酵培养的步骤；和3)从步骤2)所得的发酵混合物中分离纯化出乙肝表面抗原的步骤；该方法的特征在于，在上述在步骤2)中以腺嘌呤的重量计，以低于14mg/升·小时的速率向培养基中流加腺嘌呤、腺苷、腺苷一磷酸、腺苷二磷酸或腺苷三磷酸。