发明名称 核酸扩增反应合剂之安定化
摘要 本发明提供一种用于核酸扩增反应之试剂合剂,其藉由包含一个针对非所欲反应之可逆抑制剂而被安定化。该试剂合剂消除了对于每一试剂之分开制备与品质控制之要求。本案亦包含用于制备安定化合剂的方法以及使用安定化合剂之方法。该安定化合剂亦可包含用以从细胞中释出核酸以及用以标示核酸的试剂,容许一样品内之核酸在一个单一步骤中被检测。本发明亦提供用以进行上述方法之套组。
申请公布号 TWI224622 申请公布日期 2004.12.01
申请号 TW089102709 申请日期 2000.03.08
申请人 应用基因科技公司 发明人 纳尼伯胡斯汉.戴塔古塔;纳加拉加C. 史里德哈;伍卫国
分类号 C12Q1/68;C12P19/34 主分类号 C12Q1/68
代理机构 代理人 陈长文 台北市松山区敦化北路二○一号七楼
主权项 1.一种进行核酸扩增并避免个别试剂之间的非所 欲反应之组成物,其包含一或多种进行核酸扩增所 需之试剂以及一抑制浓度之一种针对该非所欲反 应的可逆抑制剂,其中该进行核酸扩增所需之试剂 系囊封于脂质体囊中。 2.如申请专利范围第1项之组成物,其包含一或多个 核酸聚合或连接、一或多个核三磷酸、一 或多个核酸引子以及一个扩增缓冲液。 3.如申请专利范围第1项之组成物,其包含进行一核 酸扩增反应所需之所有试剂。 4.如申请专利范围第1项之组成物,其中该抑制剂系 为一个核酸结合配位基。 5.如申请专利范围第4项之组成物,其中该核酸结合 配位基系为一个嵌入化合物。 6.如申请专利范围第5项之组成物,其中该嵌入化合 物系为单加合形成。 7.如申请专利范围第5项之组成物,其中该嵌入化合 物是一个香豆素(furocoumarin)或啡啶(phenanthridine) 。 8.如申请专利范围第7项之组成物,其中该香豆素 系为4'-胺基甲基trioxsalen("AMT")。 9.如申请专利范围第7项之组成物,其中该香豆素 系为一个当归根素衍生物。 10.如申请专利范围第4项之组成物,其中该结合配 位基系为一个非嵌入化合物。 11.如申请专利范围第10项之组成物,其中该非嵌入 化合物系择自于下列群中:benzimides、刚果素( netropsin)和代塔霉素(diatamycin)。 12.一种扩增核酸之方法,其包括: 将一个要被扩增的核酸模版加至如申请专利范围 第1项之组成物中,以及 选择性地加入一稀释剂至足够数量以降低该抑制 剂之浓度,而藉此该抑制剂实质上不会抑制该扩增 反应;及 在足以达成扩增之条件下培育混合物。 13.一种制备进行核酸扩增并避免个别试剂之间的 非所欲反应之组成物之方法,其包括混合一或多种 进行核酸扩增所需之试剂与一非所欲反应之可逆 抑制剂,其中该抑制剂被加入至该组成物之浓度系 抑制该非所欲反应,但在该组成物随后被稀释时, 该浓度系为非抑制性的,且其中至少该进行核酸扩 增所需之试剂系囊封于脂质体囊。 14.如申请专利范围第13项之方法,其中该组成物进 一步包含一种用以从细胞中释出核酸的脂质。 15.如申请专利范围第14项之方法,其中该脂质被用 来生成脂质体囊,而该组成物被囊封在脂质体囊内 。 16.如申请专利范围第13项之方法,其中该核酸扩增 系选自于下列群中:聚合链反应法、连接链反 应法、转录为主的扩增反应、核酸序列为主的扩 增反应以及股移位扩增反应。 17.如申请专利范围第13项之方法,其中该核酸扩增 系为一种转录为主的扩增反应,而该抑制剂系为一 磷酸根离子。 18.如申请专利范围第13项之方法,其中该核酸扩增 系为连接链反应法,而该抑制剂系为处在1.25mM浓 度下之一磷酸根离子。 19.如申请专利范围第13项之方法,其中该抑制剂系 为一个核酸结合配位基。 20.如申请专利范围第19项之方法,其中该核酸结合 配位基系为一个嵌入化合物。 21.如申请专利范围第20项之方法,其中该嵌入化合 物是4'-胺基甲基trioxsale("AMT")。 22.如申请专利范围第19项之方法,其中该核酸结合 配位基系为一个非嵌入化合物。 23.一种套组,其包含一个装有如申请专利范围第1 项之组成物之一小瓶。 24.如申请专利范围第23项之套组,其中组成物包含 一或多种核酸聚合或连接、一或多种核三 磷酸、一或多种核酸引子以及一个扩增缓冲液。 25.如申请专利范围第23项之套组,其中该抑制剂系 为一个核酸结合配位基。
地址 美国
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