发明名称 玉米浸泡水中提取、提纯脂多糖的方法
摘要 本发明提供一种在玉米浸泡水中提取、提纯脂多糖的方法。先通过等电点法、超滤法、三氯乙酸法联合使用分离浸泡水中的蛋白质,经进行纳滤膜浓缩,再用乙醇沉淀法进一步分离蛋白质,然后用活性炭提取浸泡水中的脂多糖,通过活性炭色谱法和离子交换色谱法提纯脂多糖,最终得到的脂多糖产品纯度高达97.4%以上。
申请公布号 CN1546532A 申请公布日期 2004.11.17
申请号 CN200310109680.2 申请日期 2003.11.28
申请人 河北农业大学 发明人 钱东平;曲保雪;杨世凤;霍晓静;牛晓颖;孟祥书;李瑞奇;杨晓娟;齐晓娜
分类号 C08B37/00 主分类号 C08B37/00
代理机构 石家庄汇科专利商标事务所 代理人 周大伟
主权项 1、一种玉米浸泡水中提取、提纯脂多糖的方法,其特征是本方法通过分别采用超滤法、等电点法、三氯乙酸法三种方法分离玉米浸泡水中的蛋白质,再用纳滤膜将浸泡水浓缩,并通过乙醇沉淀法进一步分离浸泡水中的蛋白质,最后,用活性炭将脂多糖从浸泡水中提取出来:(1)等电点法分离蛋白及普通多糖:用饱和氢氧化钠溶液调节浸泡水中的PH值到7.3,将浸泡液通过分离机分离,在每分钟3000转转速下离心25分钟,分离沉淀上清液;(2)超滤法分离蛋白及普通多糖:选用截留分子量10万的超滤膜,对上述上清液进行超滤,取过滤液;(3)三氯乙酸法分离蛋白及普通多糖:在上述滤液中加入占其体积0.5%的三氯乙酸,搅拌30分钟,于每分钟3000转条件下离心25分钟,分离出含蛋白及普通多糖的上清液;(4)浓缩:采用纳米过滤装置,将分离蛋白及普通多糖后的浸泡水浓缩6-10倍,经纳滤膜过滤,取浓缩后的浸泡水;(5)再分离:在上述浓缩浸泡水中加入浓度为95%的乙醇,使浸泡水中乙醇浓度达到30%,搅拌5分钟,于每分钟2600转下离心30分钟,分离后取上清液;(6)提取:将上述上清液PH值调整为6.50,加入占其重量1.5-2.5%的经处理的活性炭,搅拌15分钟,静置10分钟,最后过滤,分离取出吸附了脂多糖活性炭;(7)提纯:将吸附了脂多糖的活性炭装填于1.6×90厘米的色谱柱中,用10毫摩尔每升三羟甲基氨基甲烷-盐酸/10毫摩尔每升氯化钠进行洗脱,洗脱液流速为每小时8毫升,分步收集洗脱液,每管收集4毫升,共收集52管,将第27~36管洗脱液合并,冷冻干燥;将DEAE-葡聚糖凝胶A-50装填于1.6×40厘米的色谱柱中。取上述干燥产物0.25克,溶于6毫升的10毫摩尔每升三羟甲基氨基甲烷-盐酸/10毫摩尔每升氯化钠中,将其加入色谱柱。用浓度依次增加的三羟甲基氨基甲烷-盐酸/氯化钠溶液进行洗脱,同时进行分步收集。每管收集6毫升,共收集60根管,洗脱剂流速为每小时8毫升;(8)脱盐:将第34~52根管的洗脱液合并,用葡聚糖凝胶G-15层析柱进行脱盐,以超纯水洗脱,最后冻干得到脂多糖成品。
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