真空渗透辅助大豆原位丛生芽转化的方法

摘要

一种真空渗透辅助大豆原位丛生芽转化的方法，将种子经过消毒放在萌发培养基上萌发，取去除顶芽后的外植体，放在预培养基上预培养，在真空条件下进行一定时间的农杆菌感染处理后，放在共培养基上共培养。取出后放在含有卡那霉素的除菌培养基上除菌，放在芽伸长培养基上筛选不定芽，然后诱导生根移栽。本发明采用农杆菌转化腋芽分生组织区的方式，在感染过程中采用真空渗透的方法，从而提高转化率，得到较多的转化植株。

主权项

1、一种真空渗透辅助大豆原位丛生芽转化的方法，其特征在于包括如下具体 步骤： 1)大豆种子经过消毒，放在MSB+6-BA0.4mg/L(PH5.8)培养基上萌发5天，去顶 芽并制造伤口，得到外植体，放在MSB+6-BA10mg/L+IBA0.2mg/L(PH5.8) 培养基预培养一天； 2)在0.06-0.08MPa真空压力条件下，农杆菌感染10～20分钟(OD_600nm≈0.5)，放 在MSB+6-BA1.0mg/L+IBA0.2mg/L(PH5.8)培养基上共培养3天，取出放在 MSB+6-BA0.5mg/L+IBA0.1mg/L+头孢霉素300mg/L+羧苄青霉素300mg/L (PH5.8)培养基上除菌2周； 3)除菌后的外植体放在MSB+卡那霉素80mg/L(PH5.8)培养基上，每2周转接一 次，进行筛选至出现不定芽，伸长到1～2cm时切除子叶，至伸长到3～4cm； 4)切下外植体上的不定芽并放在1/2MSB+卡那霉素50mg/L(PH5.8)培养基上，进 行转化芽诱导生根15～20天，移栽到大盆直至获得转化植株产生的种子，其 中，1/2MSB为MS培养基中的无机成分减半+B5培养基中的有机成分。