一种消减杂交文库构建方法

摘要

本发明公开了一种消减杂交文库构建方法，该方法包括以下步骤：(1)消减杂交装置的制备；(2)检测组和驱动组的酶切；(3)驱动组的固定；(4)检测组连接接头；(5)进行消减杂交；(6)消减产物的分组扩增；(7)消减杂交文库的构建。与传统的物理消减杂交方法相比，本发明具有以下优点：1)消减杂交装置成本低，制作简单；2)尼龙膜与核酸分子以共价键结合，结合牢固；3)在杂交过程中可控制杂交温度和时间；4)可根据需要控制杂交轮次；5)洗脱体积可按需要控制在数十微升，便于进一步的操作；6)试验操作简单，可重复性好；7)在消减杂交后进行PCR，避免了假阳性的出现；8)消减后进行分组PCR，可使低丰度的差异表达cDNA扩增。

主权项

1、一种消减杂交文库构建方法，包括以下步骤：(1)消减杂交装置的制备：将消减杂交装置制成一尼龙膜柱；(2)检测组和驱动组的酶切：用限制性内切酶分别酶切检测组和驱动组DNA或cDNA；(3)驱动组的固定：将酶切后的驱动组DNA或cDNA加于尼龙膜柱上，紫外交联，固定；(4)检测组连接接头：将酶切后的检测组DNA或cDNA连接接头；(5)进行消减杂交：将连接接头后的检测组加到固定有驱动组的尼龙膜柱上，进行数轮杂交，得消减产物；(6)消减产物的分组扩增：用分组引物将消减产物分组进行扩增，得扩增产物；(7)消减杂交文库的构建：扩增产物与T载体连接，构建消减文库。