一种培养发菜细胞的方法

摘要

本发明公开了一种培养发菜细胞的方法，1.培养液的配制：将配制好的贮藏液加入水中的顺序是，硝酸钠、磷酸氢二钾、七水硫酸镁、二水氯化钙、九水硅酸钠、微量金属元素溶液PIV、土壤浸出液按比例配制；2.藻细胞匀浆的制备，首先将野生发菜丝状体用乙醇和蒸馏水洗涤，无菌培养液浸泡8-10小时；其次是用玻璃匀浆器将丝状体匀浆破碎，匀浆液用于细胞培养；3.藻种无菌纯化；4.藻细胞培养；5.实时监控；6.收获；7.干燥；8.继续培养。本发明方法简单，操作方便，安全无污染，生长周期短，生产效率高，营养成分全面，营养含量高，广泛适用于城乡规模化生产培养。

主权项

1、一种培养发菜细胞的方法，包括下列步骤：A、培养液配制，将配制好的贮藏液加入水中的顺序是，硝酸钠490-500mg/L、磷酸氢二钾35-40mg/L、七水硫酸镁70-75mg/L、二水氯化钙35-36mg/L、九水硅酸钠55-60mg/L、微量金属元素PIV3ml/L、土壤浸出液3ml/L，配制好的培养液用118-122℃高温干热灭菌，60-90分钟冷却后使用；B、藻细胞匀浆的制备，首先将发菜丝状体用95％乙醇溶液浸泡0.5-1.0分钟，再用蒸馏水洗涤3-4次，在灭菌的培养液中洗涤2-3次，再使用灭菌的培养液浸泡8-10小时，将丝状体放在玻璃匀浆器中，加入石英砂，研磨成浆状物质；C、藻种无菌纯化，匀浆液接种到无菌培养液中，置于24～26℃的光照培养箱静置培养，培养40d后，在无菌室内显微镜下挑出单根藻丝体或单细胞，用无菌培养液洗涤4-5次，进行静置再培养，重复该操作5-8次，得到该藻的无菌藻种，将分纯的藻种接种到无菌培养液，在玻璃容器中通以过滤空气进行培养，制备得到该藻的扩大培养用藻种；D、藻细胞培养，培养条件是温度24～26℃，光照40～50μmol.m-2s-1，光暗周期12小时：12小时，气体流量5L/分钟左右通气培养；E、实时监控，监控条件和标准是：温度24-26℃，光照40～50μmol.m-2s-1，光暗周期12小时：12小时，pH8.0-8.5；F、收获，在藻液浓度达到OD750nm值在0.5-1.0的时候采收，使用200目的筛绢网进行采收；G、干燥，藻泥在45℃以下晒干、风干或烘干；H、继续培养，在收集藻泥后的培养容器保留藻液，更换培养液，进行继续培养。