一种嵌套聚合酶链式反应方法及其应用

摘要

本发明提供嵌套聚合酶链式反应方法及其在核酸检测中的应用，通过控制PCR循环不同阶段的退火和变性温度，即在第一阶段中，退火温度为60－80℃，第二阶段变性温度为65－87℃，第一阶段和第二阶段之间有2－4个循环的过渡阶段，此阶段变性温度与第一阶段相同而退火温度与第二阶段相同，以克服现行各种嵌套式PCR方法步骤繁琐、易污染、内外套引物的扩增相互影响或需要特殊反应容器的缺点，能有效地排除非专一扩增产物的形成。反应在单管内进行，简单方便，不开管无污染。进一步提供的三重嵌套使专一性进一步提高。适合用于人源和病原微生物的核酸检测。

主权项

1.一种嵌套的聚合酶链式反应方法，由2对相互嵌套的引物同时针对模板DNA链进行如下反应：(1)模板变性；(2)引物退火；(3)DNA聚合酶催化下延伸合成互补DNA链；(4)按步骤(1)-(3)循环进行扩增反应；其特征在于，整个反应分为三阶段，在第一阶段的5-25个循环中，退火温度范围60-80℃，在第二阶段的5-25个循环中，变性温度范围为65-87℃，在第一阶段和第二阶段之间有2-4个循环的过渡阶段，此阶段变性温度与第一阶段相同而退火温度与第二阶段相同。