主权项 |
1.一种树兰的无菌播种和组织培养方法,其特征在于包括4个步骤:(1)材料选择:授粉110-130天后的果实作为外植体;(2)无菌播种:用70%-80%的酒精浸泡20-40秒后置于8%-15%的次氯酸钠溶液中消毒10-30分钟,无菌水冲洗4-5次后切开果实,用接种针将白色粉末状胚均匀撒播接种到培养基中,所述培养基每升中含有的椰子水100毫升,琼脂7克,蔗糖20克,其余成分为N6;(3)组织培养:利用上述步骤生长的无菌实生苗的茎尖或茎节在培养基中形成丛生芽,所述的培养基每升中含有6-苄基嘌呤0.5毫克,琼脂7克,蔗糖20克,其余成分为MS,在培养基中继代增殖,所述的培养基每升中含有6-苄基嘌呤0.5毫克,琼脂7克,蔗糖30克,其余成分为MS,丛生芽在生根时以培养基培养形成完整植株,所述的培养基每升中含有萘乙酸0.2毫克,香蕉汁100克,琼脂7克,蔗糖20克,其余的成分为1/2MS;(4)试管苗移栽:当试管苗能长至3-4厘米高时,转移到自然光下炼苗7-10天,然后将其从玻璃瓶中取出,洗净根部的培养基,移入体积比为1∶1的泥炭和粗椰壳的混合基质中;在上述所有步骤中所述的培养基pH5.4-5.6,培养温度(26±2)℃,光照度1500~2000lx,光照12小时/天。 |