一种酵母基因工程菌及内切菊粉酶制剂和应用方法

摘要

本发明提出一种酵母基因工程菌Pichia pastoris GS115/HY005是通过PCR方法或者DNA文库杂交方法，从曲霉属菌株筛选获得内切菊粉酶基因，将其克隆并插入到毕赤酵母整合表达载体中，然后将得到的含内切菊粉酶基因表达载体导入到毕赤酵母中，再从中筛选出一种高效表达内切菊粉酶的酵母基因工程菌。用该酵母基因工程菌制备的内切菊粉酶，其酶活性可达300u/ml以上，用其水解菊粉反应时间短，转化效率高，从而能高效、经济地转化制备低聚果糖。

主权项

1、一种酵母基因工程菌(毕赤酵母菌Pichia pastoris GS115/HY005)，保藏号为CCTCC NO：M201032，是通过PCR方法或者DNA文库杂交方法，从曲霉属菌株筛选获得内切菊粉酶基因，其特征在于根据黑曲霉内切菊粉酶基因序列，利用常规聚合方法合成一对引物，应用常规PCR方法用曲霉NRRL3135的DNA为模板，在常规的PCR扩增条件下，扩增出0.5----2Kb的DNA片段，克隆到T----载体pMD18--T上，经测序证实克隆至pMD18--T载体上的DNA片段的正确性后，用BamHI和NotI将克隆得到的NRRL3135的内切菊粉酶基因切下来，插入到毕赤酵母(Pichia pastoris)表达载体pPIC3.5k的BamHI和NotI酶切位点之中，再通过电转化导入毕赤酵母宿主GS115中，再从中筛选出高效表达内切菊粉酶的酵母基因工程菌。