| 主权项 |
1.一种乳酸菌穿梭载体,其至少包括:(a)一大肠杆菌质体复制起源区;(b)一真核细胞基因表现卡匣,其至少包括一真核细胞基因转录启动子、多重限制选殖区及一转录终止区,其中一外来目标基因(a desired gene)可以插入在多重限制选殖区;(c)一乳酸菌质体序列,其至少包括一正股复制起源区及一与质体复制有关的蛋白质序列;以及(d)一非抗药性筛选基因及其启动子。2.如申请专利范围第1项所述之乳酸菌穿梭载体,其具有如序列辨识编号:1(SEQ ID NO:1)之核酸序列。3.如申请专利范围第1项所述之乳酸菌穿梭载体,其于中国台湾食品工业发展研究所菌种中心之寄存号码是CCRC 940294,寄存日:申华公元2000年5月16日。4.如申请专利范围第1项所述之乳酸菌穿梭载体,其具有如序列辨识编号:2(SEQ ID NO:2)之核酸序列。5.如申请专利范围第1项所述之乳酸菌穿梭载体,其于中国台湾食品工业发展研究所菌种中心之寄存号码是CCRC 940295,寄存日:1912年5月16日。6.如申请专利范围第1项所述之乳酸菌穿梭载体,其中该真核细胞基因转录启动子为细胞巨大病毒启动子。7.如申请专利范围第1项所述之乳酸菌穿梭载体,其中该乳酸菌质体序列,是分离自胚芽乳酸菌Lactobacillus plantarum中之2.1kb的质体。8.如申请专利范围第7项所述之乳酸菌穿梭载体,其中在该乳酸菌质体序列中,与质体复制有关的蛋白质是含有317个氨基酸的蛋白质Rep A。9.如申请专利范围第1项所述之乳酸菌穿梭载体,其中该非抗药性筛选基因是-半乳糖基因。10.如申请专利范围第9项所述之乳酸菌穿梭载体,其中该-半乳糖基因的启动子是抗红霉素基因启动子。11.如申请专利范围第1、2、4项中任一项所述之乳酸菌穿梭载体,其宿主为一革兰氏阳性细菌,其中该细菌的基因组之-半乳糖基因无法产生正常酵素功能。12.如申请专利范围第11项所述之乳酸菌穿梭载体,其中该宿主为乾酪乳酸菌Lactobacillus casei(亚种casei)之突变株,其于中国台湾食品工业发展研究所菌种中心之寄存号码是CCRC 910147,寄存日:1912年5月16日。13.一种表现外源性基因之试剂组,包括:(1)如申请专利范围第1项所述之乳酸菌穿梭载体;(2)一乳酸菌穿梭载体之宿主细胞,其中该细胞的基因组之-半乳糖基因无法产生正常酵素功能;以及(3)一真核细胞。14.一种DNA疫苗,包含一乳酸菌穿梭载体,包括(a)一大肠杆菌质体复制起源区;(b)一真核细胞基因表现卡匣,其至少包括一真核细胞基因转录启动子、多重限制选殖区及一转录终止区,其中一抗原基因(antigenic gene)可以插入在多重限制选殖区;(c)一乳酸菌质体序列,其至少包括一正股复制起源区及一与质体复制有关的蛋白质序列;以及(d)一非抗药性筛选基因及其启动子。图式简单说明:第1图显示pCLP1及pCLP2质体之构筑;第2图显示pCRII/EmrP--galactosidase质体之构筑;第3图显示pCLP3、pCLP4、pCLP5及pCLP6质体之构筑;第4图显示pCLP7及pCLP8质体之构筑;第5(A)-(G)图显示乳酸菌穿梭载体基因pCLP7之核酸序列(序列辨识编号:1);第6(A)-(G)图显示乳酸菌穿梭载体基因pCLP8之核酸序列(序列辨识编号:2);以及第7图显示pCLP7及pCLP8质体之稳定性试验结果,(A)是原始的质体,(B)是经100代继代培养之后的限制图谱;其中,(A)图中:第1道为DNA标记(Gene RulerTM 1kb Ladder, MBI),第2、6道为未切之质体,第3、7道系以XbaI处理,第4、8道系以EcoRI处理,第5、9道系以HindIII处理,第10道为DNA标记(Gene RulerTM100bp Ladder, MBI);其中第2-5道为质体pCLP7,第6-9道为质体pCLP8;(B)图中:第1道为DNA标记(Gene RulerTM 100bp Ladder, MBI),第2道为DNA标记(GeneRulerTM lkb Ladder, MBI),第3、7道为未切之质体,第4、8道系以XbaI处理,第5、9道系以EcoRI处理,第6、10道系以HindIII处理;其中第3-6道为质体pCLP7,第7-10道为质体pCLP8。 |
