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"TéCNICA IMUNOENZIMáTICA (ELISA) REVERSA PARA A QUANTIFICAçãO DE IgE ESPECìFICA A ALéRGENOS". A presente invenção, ELISA reversa, tem como objetivo quantificar níveis séricos de anticorpos IgE específicos a alérgenos como uma potencial ferramenta para o diagnóstico etiológico de hipersensiblidade em pacientes com doença alérgica como também para o acompanhamento da imunoterapia alergênica destes pacientes. Desta forma, anticorpos monoclonais anti-alérgenos específicos, como por exemplo, anti-Der p 2, são ligados às placas de microtitulação ELISA para capturar o alérgeno correspondente (Der p 2) presente no extrato bruto de Dermatophagoides pteronyssinus que, subsequentemente interage com anticorpos IgE específicos em amostras de soros de pacientes alérgicos. Estes anticorpos são posteriormente detectados pela adição de anticorpo policional anti-IgE humana biotinilado e subsequentemente do conjugado estreptavidina-peroxidase. A revelação da reação é feita pela adição do substrato enzimático (ABTS) e a absorvância determinada em leitor de microplacas a 405 nm. Quando comparada com ELISA convencional (cELISA) que utiliza o alérgeno Der p 2 (nativo ou recombinante purificado) diretamente na sensibilização das microplacas, ELISA reversa mostrou ser mais sensível que cELISA tanto pela porcentagem de soros positivos (70,8% versus 52.1 %) como pelos níveis de IgE específica a Der p 2 (28,4 versus 4,5 EU/mL) em pacientes asmáticos com testes cutâneos positivos a D. pteronyssinus. Em conclusão, ELISA reversa mostrou ser um método sensível e alternativo para quantificar IgE sérica específica a alérgenos, contribuindo para o diagnóstico etiológico de hipersensibilidade em pacientes com doença alérgica respiratória bem como fornecer valiosas informações para o acompanhamento da imunoterapia com peptídeos ou alérgenos relevantes.
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