恶性肿瘤广谱基因工程纳米疫苗的制备方法

摘要

本发明公开了一种恶性肿瘤广谱基因工程纳米疫苗的制备方法，采用肿瘤特异性共有抗原基因黑色素瘤抗原－1(MAGE－1)和生物免疫佐剂热休克蛋白70(Hsp70)基因连接，构成融合基因(MAGE－1～Hsp70)，通过大肠杆菌表达，分离与纯化，获得MAGE－1～Hsp70融合蛋白，经变性与复性，得到高活性的融合蛋白，将此融合蛋白与超抗原葡萄球菌肠毒素A组合，构成复合抗原物。制备纳米脂质体，包裹复合抗原物，通过N－羟基琥珀酰亚胺酯与Hsp70分子连接，形成N－Hsp70，将其插入纳米脂质体磷脂膜外层，构成恶性肿瘤广谱基因工程纳米疫苗。采用本发明制备的恶性肿瘤广谱基因工程纳米疫苗具有以下优点：1)采用皮下注射，使用简便、安全；2)抗瘤广谱；3)具有靶向性；4)杀瘤效果强。

主权项

1.一种恶性肿瘤广谱基因工程纳米疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将肿瘤特异性抗原MAGE-1基因与生物免疫佐剂结核杆菌热休克蛋白70(Hsp70)基因连接，构成MAGE-1～Hsp70融合基因，通过大肠杆菌进行原核表达，获得MAGE-1～Hsp70融合蛋白；2)上述MAGE-1～Hsp70融合蛋白表达产物经6M尿素变性，SephadexG-25凝胶色谱柱复性后，再通过Ni2+-NTA Agarose亲和色谱和ATP-Sepherose4B亲和色谱进行分离与纯化，得到有活性的MAGE-1～Hsp70融合蛋白；3)将有活性的MAGE-1～Hsp70融合蛋白与超抗原葡萄球菌肠毒素A(SEA)以摩尔数比为1000∶1组合，构成复合抗原物；4)采用卵磷脂和胆固醇，通过超声技术制备纳米脂质体，包裹复合抗原物；5)最后，通过N-羟基琥珀亚胺酯与Hsp70分子连接，形成N-Hsp70，将N-Hsp70与纳米脂质体混合，N-Hsp70插入纳米脂质体磷脂膜外层，构成恶性肿瘤广谱基因工程纳米疫苗。