发明名称 |
快速检测创伤弧菌的试剂盒及检测方法 |
摘要 |
本发明涉及检测创伤弧菌的试剂盒及检测方法。试剂盒包括:(a)DNA提取试剂:含缓冲试剂A和细胞裂解试剂B,(b)聚合酶链式反应试剂:包括反应预混试剂C和反应引物试剂D,试剂D中的特异引物对VP<SUB>01</SUB>为5′-ACCAGTGATTGTCTTGCACCACAA;VP<SUB>02</SUB>为5′-GCGAACTCGCTTA TCTCCGCTAA,(c)电泳和显色试剂,包括试剂E和试剂F。检测方法包括(a).样品处理,(b).DNA提取,(c).PCR扩增,(d).电泳和显色检测,紫外光下检测,如果有一条300核苷酸对的条带,说明样品有创伤弧菌感染或污染;反之则没有。本发明的优点和积极效果是检测快速,灵敏度极高。 |
申请公布号 |
CN1527057A |
申请公布日期 |
2004.09.08 |
申请号 |
CN03146929.9 |
申请日期 |
2003.09.25 |
申请人 |
中国科学院南海海洋研究所 |
发明人 |
陈偿;胡超群 |
分类号 |
G01N33/50;G01N33/535;G01N33/569;G01N21/78;C12Q1/00 |
主分类号 |
G01N33/50 |
代理机构 |
广州科粤专利代理有限责任公司 |
代理人 |
赖汉光 |
主权项 |
1.一种快速检测创伤弧菌的试剂盒,包括:(a)DNA提取试剂:含缓冲试剂A和细胞裂解试剂B,试剂A含有NaCl 0.1-0.3M、pH8.0的三羟基甲基氨基甲烷1-100mM、pH8.0的乙二胺四乙酸0.1-10mM和V/V浓度为0-20%的曲拉通X-100;试剂B含有浓度为1-10mg/ml的溶菌酶和pH8.0、浓度为1-100mM三羟基甲基氨基甲烷;(b)聚合酶链式反应试剂:包括反应预混试剂C和反应引物试剂D,试剂C含有10倍聚合酶链式反应缓冲液、热聚合酶和灭菌双蒸水,含量分别为2.5-5.0μl、0.5-2.5个单位和18-35.5μl;试剂D:包括特异引物对VP01和VP02、dNTP(四种脱氧核苷酸的混合物)及MgCl2,含量分别为0.2-1μM和0.2-1μM、20-200μM及0.5-10mM;VP01特指5′-ACCAGTGATTGTCTTGCACCACAA;VP02特指5′-GCGAACTCGCTTATCTCCGCTAA;(c)电泳和显色试剂,包括试剂E和试剂F,试剂E:为50倍电泳缓冲液,含三羟基甲基氨基甲烷-乙酸和乙二胺四乙酸,浓度分别为0.04M和0.001M;试剂F:含W/V为0.8-2%的琼脂糖和0.5-20μg/ml溴乙锭。 |
地址 |
510260广东省广州市新港西路164号 |