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1.一种酵母插入性质体,其包括一生物素合成基 因、一协助质体DNA插入的DNA序列、一启动子以及 一标记基因,其中该生物素合成基因为Candida utilis之生物素合成基因,且具有序列辨识编号:1 之核酸序列,其DNA序列如下: 2.如申请专利范围第1项所述之插入性质体,其中该 协助质体DNA插入的DNA序列系择自Candida utilis之NsiI- BamHI 18s rDNA片段、URA3 DNA片段及HIS3 DNA片段所组成 的族群中。 3.如申请专利范围第1项所述之插入性质体,其中该 标记基因为抗环亚胺己酮之标记基因。 4.如申请专利范围第1项所述之插入性质体,其中该 启动子为Candida utilis的pL41启动子或Saccharomyces cerevisae的pADH1启动子。 5.如申请专利范围第1项所述之插入性质体,系择自 以下所组成的族群中: (i)pMCC21(具有如第6图所示之构筑,寄存编号CCRC 940296,1912年6月20日); (ii)pMCC31S(具有如第8图所示之构筑,寄存编号CCRC 940297,1912年6月20日); (iii)pMCC32H(具有如第9图所示之构筑,寄存编号CCRC 940298,1912年6月20日); (iv)pMCC33U(具有如第10图所示之构筑,寄存编号CCRC 940299,1912年6月20日); (v)pMCC35U(具有如第11图所示之构筑,寄存编号CCRC 940300,1912年6月20日); (vi)pMCC36H(具有如第12图所示之构筑,寄存编号CCRC 940301,1912年6月20日);以及 (vii)pMCC38S(具有如第13图所示之构筑,寄存编号CCRC 940302,1912年6月20日)。 6.一种高生物素含量酵母之制备方法,包括: (a)构筑一插入性质体,其包括一生物素合成基因 、一协助质体DNA插入的DNA序列、一启动子及一标 记基因; (b)将该插入性质体线形化; (c)将该线形化之插入性质体转殖至酵母;以及 (d)使该生物素合成基因与该酵母染色体进行重 组作用; 其中该生物素合成基因为Candida utilis之生物素 合成基因,且具有序列辨识编号:1之核酸序列, 其DNA序列如下: 7.如申请专利范围第6项所述之制备方法,其中该协 助质体DNA插入的DNA序列系择自Candida utilis之NsiI- BamHI 18s rDNA片段、URA3 DNA片段及HIS3 DNA片段所组成 的族群中。 8.如申请专利范围第6项所述之制备方法,其中该标 记基因为抗环亚胺己酮之标记基因。 9.如申请专利范围第6项所述之制备方法,其中该启 动子为Candida utilis的pL41启动子或Saccharomyces cerevisae的pADH1启动子。 10.如申请专利范围第6项所述之制备方法,其所制 得的高生物素含量食用酵母,可应用于饲料添加物 、食品添加物或化妆品之原料。 11.一种利用高生物素含量的食用酵母生产生物素 之方法,该方法包括将一高生物素含量之食用酵母 ,以下述步骤制备,包括: (a)构筑一插入性质体,其包括一生物素合成基因 、一协助质体DNA插入的DNA序列、一启动子及一标 记基因; (b)将该插入性质体线形化; (c)将该线形化之插入性质体转殖至酵母;以及 (d)使该生物素合成基因与该酵母染色体进行重 组作用; 其中该生物素合成基因为Candida utilis之生物素 合成基因,且具有序列辨识编号:1之核酸序列, 其DNA序列如下: ;以及在一适当环境下培养并回收。 12.如申请专利范围第11项所述之方法,其所生产的 生物素,可应用于饲料添加物、食品添加物或化妆 品之原料。 图式简单说明: 第1图显示大肠杆菌(E. coli)之生物素生化合成基因 之构造及调控图。 第2图显示质体pMS3之构筑流程。此质体包括下列 片段:S. cerevisiae的乙醇去氢启动子(pADH1)以表现S . cerevisiae的BIO2基因、突变的L41作为抗环亚胺己酮 (cycloheximide)的标记基因以及C. utilis的18s rDNA序列 。 第3图显示质体pMC6之构筑流程。此质体包括下列 片段:C. utilis核糖体蛋白L41之启动子pL41以及S. cerevisiae的生物素合成BIO2基因。 第4图显示质体pMC9之构筑流程。此质体包括下列 片段:C. utilis核糖体蛋白L41之启动子pL41以表现S. cerevisiae的BIO2基因、突变的L41作为抗环亚胺己酮 的标记基因以及C. utilis的18s rDNA序列。 第5图显示质体pMCC11之构筑流程。此质体包括下列 片段:C. utilis核糖体蛋白L41之启动子pL41以及C. utilis的生物素合成BIO2基因。 第6图显示质体pMCC21之构筑流程。此质体包括下列 片段:C. utilis核糖体蛋白L41之启动子pL41以表现C. utilis的BIO2基因(编码204个胺基酸)、突变的L41作为 抗环亚胺己酮的标记基因以及C. utilis的18s rDNA序 列。 第7图显示质体pMCC-E13之构筑流程。此质体包括下 列片段:E. coli的pTac基因启动子以及C. utilis的生物 素合成BIO2基因。 第8图显示本发明之质体pMCC31S之构筑。此质体包 括下列片段:C. utilis核糖体蛋白L41之启动子pL41、C. utilis的生物素合成BIO2基因(编码233个胺基酸,为 完整之BIO2蛋白)、C. utilis的18s rDNA序列以及突变的 L41作为抗环亚胺己酮的标记基因。 第9图显示本发明之质体pMCC32H之构筑。此质体包 括下列片段:C. utilis核糖体蛋白L41之启动子pL41、C. utilis的生物素合成BIO2基因、C. utilis的HIS3基因 片段(0.5 kb)以及突变的L41作为抗环亚胺己酮的标 记基因。 第10图显示本发明之质体pMCC33U之构筑。此质体包 括下列片段:C. utilis核糖体蛋白L41之启动子pL41、C. utilis的生物素合成BIO2基因、C. utilis的URA3基因 片段(0.59及0.50 kb)以及突变的L41作为抗环亚胺己酮 的标记基因。 第11图显示本发明之质体pMCC35U之构筑。此质体包 括下列片段:C. utilis核糖体蛋白L41之启动子pL41、C. utilis的生物素合成BIO2基因、C. utilis的URA3基因 片段(0.59及0.50 kb)以及突变的L41作为抗环亚胺己酮 的标记基因。 第12图显示本发明之质体pMCC36H之构筑。此质体包 括下列片段:C. utilis核糖体蛋白L41之启动子pL41、C. utilis的生物素合成BIO2基因、C. utilis的HIS3基因 片段(0.54及0.44 kb)以及突变的L41作为抗环亚胺己酮 的标记基因。 第13图显示本发明之质体pMCC38S之构筑。此质体包 括下列片段:C. utilis核糖体蛋白L41之启动子pL41、C. utilis的生物素合成BIO2基因、C. utilis的18s rDNA基 因片段(0.54及1.75 kb)以及突变的L41作为抗环亚胺己 酮的标记基因。 |
