主权项 |
1、一种微生物连续催化法生产丙烯酰胺的方法,其特征在于该方法,包括下列步骤:(1)产酶细胞的制备:先进行发酵种子的培养,在三角瓶或种子罐中装入10-70%的种子培养基,灭菌后接入1-10%菌种,在20-40℃下,旋转式摇床中100-400rpm,振荡培养30-120小时,然后在50L-20m3的发酵罐其发酵培养基装入量为40%-70%,实罐消毒后接入2-7%的种子液,在通气量1∶0.2-1∶1,V.V.M;搅拌转速:50-400rpm;罐压0.03-0.06MP;温度:20-40℃,发酵30-200小时;(2)连续催化水合生产过程:将发酵液在分离因素≥3000,离心分离,去上清液,获得产腈水合酶细胞;将细胞悬浮于去离子水或者纯净水或PH7.0-8.0的缓冲液中,加入到反应釜中,发酵液与反应液体积的比例维持在≥1%,在5-55℃的温度下,50-300rpm的搅拌速度下进行酶催化反应,当产物浓度≥5%时,开始通过膜过滤系统出产物,同时开始补加丙烯腈和水,该类膜过滤系统让产物通过,并达到去除蛋白质及其它杂质,而能使游离细胞重新返回反应釜参与反应,通过调节丙烯腈和水的流加速度和产物丙烯酰胺溶液的流出速度,从而使流出的产物丙烯酰胺溶液浓度保持在设定的范围,底物丙烯腈的浓度最低可小于30ppm,最终转化率为≥99.9%。 |