布氏白僵菌杀虫剂的生产方法及其用途

摘要

本发明涉及了一种蛴螬专用白僵菌杀虫剂的生产方法及其用途。该方法是利用本发明人本发明人从蛴螬危害严重地区采集罹病虫尸，分离纯化并进行筛选，得到布氏白僵菌D5菌株采用液体培养法进行白僵菌杀虫剂的生产，其特点是本法适应工业化大生产的目的，生产周期短，产品质量稳定，该产品对蛴螬杀虫效果显著。

主权项

1.一种蛴螬专用白僵菌杀虫剂的生产方法，其特征主要包括以下几个步骤：(1)将D5原始 生产菌株，一种布氏白僵菌(Beauveriabringniartii)，已于2002年4月17日保存在中国 微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其简称为CGMCC，保藏编号为CGMCCNO.0737， 均匀接入斜面培养基上，置在26℃±1℃的培养箱中培养培养7～10d，分生孢子产生良好 时取出，可作生产用斜面菌种；(2)将斜面菌种中加入液体培养基或灭菌水洗下培养物成菌 悬液；(3)在摇瓶及种子罐中用液体培养法将种子放大培养至发酵罐培养所需种子液的量， 罐装系数：70％，发酵控制条件：罐压0.2kg/cm²，通气量按v/v/min计为1∶1，罐温27 ℃±1℃，培养时间为36h，菌丝量大，菌液变稠，有少量芽生孢子形成，无污染，可作为 种子液；(4)实罐消毒和管道消毒：在发酵罐进行实罐消毒的同时，进行种子罐与发酵罐 接种管道的消毒，消毒时微开管道上各有关排气阀门，务必使整条管道畅通，不成死角， 调节进气阀至管内压力1.2kg/cm²，保压30min，然后自前至后依次关闭各进气阀，冷却 待用，通过两罐压差，将合格的二级液种按1∶10的比例压到发酵罐，压种毕迅速关闭两 罐出料阀，然后调节好罐压力和进、排气阀，开动搅拌、进行培养，培养：搅拌速度200r/min， 罐温27℃±1℃，罐内压力0.5kg/cm²，通气量按v/v/min计为1∶0.7，培养48～72h，发酵 到24～36h大量形成芽生孢子时，补充葡萄糖1％、乳糖0.3％、硼酸0.02％、磷酸二氢钾 0.3％、甘油4％，在培养中每隔4h抽样检查一次；(5)发酵液大量产孢时即菌丝80％以上均 转化为芽生孢子时放罐，发酵结束时添加经灭菌处理的固体填料硫酸铜及助剂麦麸，添加 助剂及填料后含水量20％～30％；(6)生产菌种斜面培养基配方：蔗糖2％，酵母粉0.5％， 鱼蛋白胨0.5％，硫酸铜0.005％，硫酸锌0.005％，硫酸亚铁0.005％，棉仁粉0.5％，米粉 0.5％，硼酸0.01％，硫酸锰0.002％，乳糖0.3％，琼脂2％；(7)液体培养基配方：蔗糖 2％，酵母粉0.5％，鱼蛋白胨0.5％，硫酸铜0.005％，棉仁粉0.5％，米粉1％，硫酸镁 0.1％，硫酸亚铁0.005％，磷酸二氢钾0.2％。