一种以结核杆菌细胞壁为靶点的药物筛选方法

摘要

本发明是通过应用现代分子生物学技术从结核分枝杆菌基因组文库中克隆了rmlB基因，其编码dTDP－D－葡萄糖－4，6－脱氢酶(RmlB)，并在大肠杆菌中表达了结核分枝杆菌的RmlB酶蛋白(rmlB是结核杆菌的生长相关基因，其基因所表达的蛋白酶是结核杆菌细胞壁形成过程中必须的)，菌株经过超声破碎细胞，离心，取上清液，利用pET表达载体上的组氨酸标记，采用组氨酸－Ni⁺亲和层析技术纯化得到RmlB酶蛋白，并建立了RmlB酶蛋白的活性测定方法。利用这个酶活性测定方法，根据加入中药、藏药及天然产物的有效成分以及组合化学产物后RmlB酶蛋白的活性大小或有无建立了抗结核药物的模型。

主权项

1.一种以结核杆菌细胞壁为靶点的药物筛选方法，其特征在于：在含有50～100mM HEPES(pH7.6)、1～10mM NAD+、100～500nmol dTDP-Glc、4～12μg/ml蛋白的RmlB酶蛋白溶液中加入中药、藏药、天然产物的有效成分或组合化学产物，在25～37℃下培育1～5hr后，再加入1m10.1MNaOH培育10～40min，取出检测318nm下吸光值的变化，根据体系吸光值的变化，确定所加入物质是否是以结核杆菌细胞壁为靶点的药物。