一种无需聚合酶链式反应的点突变方法及试剂盒

摘要

本发明涉及一种无需聚合酶链式反应的点突变方法及其试剂盒。该方法先将质粒模板变性，含点突变的引物与模板退火；然后加入DNA聚合酶和DNA连接酶，用来合成突变链，并封闭切口；接着进行第二步变性，加入选择引物并与突变链退火；用聚合酶聚合，合成另一条突变链；最后在产物中加入DpnI限制性内切酶，消化去除非突变模板。该方法由于无需PCR，使得该突变过程高保真，不会引入其它额外的突变；并且该方法价格低廉，省时，快速，操作简单。

主权项

1.一种无需聚合酶链式反应的点突变方法，包括如下步骤：1)质粒模板变性，含点突变的引物与模板退火；2)加入DNA聚合酶和DNA连接酶，用来合成突变链，连接酶封闭突变链的切口；3)第二步变性，加入选择引物并与步骤2)得到的突变链退火，得到变性混合物；4)在步骤3)得到的变性混合物中加入DNA聚合酶，聚合得到另一条突变链；5)在步骤4)的产物中加入DpnI限制性内切酶，消化去除非突变模板。