双基因特异性表达的转基因抗真菌病害油菜培育方法

摘要

本发明公开了一种利用RCR或限制性内切酶分离植物几丁质酶基因和草酸氧化酶基因的氨基酸编码序列和双子叶植物基因组衰老叶片特异表达的启动子序列，通过基因重组技术构建适合于在植物中表达的重组双基因的表达载体。利用活体或离体转基因方法将外源几丁质酶基因和草酸氧化酶基因导入油菜受体，获得转化植株。通过分子辅助选择并结合常规育种提高了油菜对真菌性病害的抗性，创造了一种抗病油菜新品种或创造油菜新资源材料的新方法。本发明的转基因油菜仅仅在需要抵抗病菌的特定时期和特定器官中表现抗病性，可以减轻转基因植株的能源消耗和生理扰乱。本发明也可以用于其他植物的育种上。

主权项

1、一种培育抗真菌性病害的油菜新品种的方法，其特征在于：A、利用聚合酶链式反应(RCR)或用限制性内切酶分离植物几丁质酶基因和草酸氧化酶基因的氨基酸编码序列和双子叶植物基因组衰老叶片特异表达的启动子序列；B、通过基因重组方法构建适合于在植物中表达的重组双基因的表达载体：C、利用活体转基因方法将外源几丁质酶基因和草酸氧化酶基因导入油菜受体，获得转化植株：D、借助报告基因和RCR方法鉴定阳性转化株，分单株收种：E、种植上季选留的种子，取叶片接种病菌和草酸胁迫鉴定，挑选有希望的株系，利用PCR方法鉴定阳性单株，进一步用分子杂交方法鉴定阳性转化株的整合拷贝数，将含1至少数几个拷贝的抗病转化株自交留种；F、种植收获的E步骤的种子，继续接种病菌和草酸胁迫鉴定，进一步考察转基因油菜抗病能力和农艺性状，从表型稳定、抗病性及农艺性状有较大改善的2-3个株系中选择其纯合的单株；G、进一步培育成油菜新品系或育种新资源。