新方法

摘要

本发明涉及用于除去抗生素耐药性和/或使质粒稳定的方法。本发明包括构建载体的步骤，所述载体含有为同向重复序列基因所包围的抗生素耐药性基因。此同向重复序列基因可以是一个必需基因或Rek－序列。在后一种情况中，载体中存在具有适宜启动子的必需基因。用所得的载体转化宿主细胞，之后去除宿主细胞中必需的染色体基因并去除细胞中载体内的抗生素耐药性基因。优选的必需基因是infA。本发明也涉及在宿主细胞内稳定维持载体的方法，在细胞中生产DNA的方法和在细胞中生产氨基酸，肽和蛋白的方法。而且，本发明还涉及已去除染色体必需基因，并含有下述载体的转化宿主细胞，该载体含有相应的必需基因，还可能含有一或多个所需的基因X。该载体不携带抗生素耐药性基因。本发明还包括从宿主获得的载体DNA在制备用于基因治疗的药物组合物，如疫苗中的用途。携带含有适宜基因X的载体的细菌可被用于大规模生产该基因的基因产物所针对的化合物。

主权项

1.用于去除抗生素耐药性和/或使质粒稳定的方法，包括如下步骤：a)构建含有为同向重复序列基因所包围的抗生素耐药性基因的载体，其中所述同向重复序列基因可以是必需基因，b)还可以在该载体中插入所述必需基因，适宜于该必需基因的启动子及一个多克隆位点，c)用a)或b)所得载体转染宿主细胞，d)去除宿主细胞中的染色体必需基因，e)体内去除抗生素耐药性基因，其中，步骤a)和b)可以用相反的顺序完成。