“锚定点灯”式寡核苷酸芯片的检测技术

摘要

本发明是一种涉及寡核苷酸芯片的制作和检测技术，采用寡核苷酸探针末端连接DNA小沟结合物(MGB)，使MGB分子具有“锚定”靶DNA分子的作用，提高寡核苷酸探针与靶DNA的亲和力和解链温度(Tm)，因而可以实施高温杂交；同时采用“点灯”式的隐性荧光物质，只有在杂交体形成时才被触发显示荧光信号。该技术可以大幅度提高杂交温度，比正常杂交温度提高10～20℃，减少溶液中靶DNA之间的复性而不影响靶DNA与探针杂交体的形成，而且使用点灯荧光物质可以避免多次清洗，缩短检测时间，还可以应用于实时动态杂交检测与自动化设备的检测。该技术可用于高通量单核苷酸多态性(SNP)和基因突变位点的检测分析。

主权项

1.本发明是一种涉及基因组DNA寡核苷酸芯片的制作和检测技术，可用于单核苷酸多态性(SNP)和基因突变位点的高通量检测分析，该芯片的制作和检测技术包括如下部分：A.采用寡核苷酸探针末端连接DNA小沟结合物(Minor Groove binders，MGB)，在杂交时具有“锚定”靶DNA的作用，提高寡核苷酸探针的亲和力和解链温度(Tm)；B.采用“点灯”荧光物质，即由杂交触发的荧光发射，当DNA双链形成时，隐性荧光物质与DNA的结合发生构象变化，产生荧光；荧光物质在杂交时加入杂交体系，不需预先标记；C.采用高温杂交，大幅度提高杂交温度，比正常杂交温度高10℃以上，可以减少杂交体系中靶DNA双链的复性，而不影响靶DNA与寡核苷酸探针杂交体的形成；D.芯片制备与检测过程包括下列步骤：a)基因突变位点或SNP探针序列的设计、连接臂及活性基团的修饰；b)MGB分子与寡核苷酸探针的共价连接；c)寡核苷酸探针阵列的制作；d)基因组DNA或其他DNA包括PCR产物的常规分离、纯化，并把DNA消化成50-200bp的片段；e)采用“点灯”(隐性)荧光物质，并加到芯片杂交体系中；f)芯片杂交与芯片扫描、杂交信号的采集。