河豚毒素高纯单体规模化制备方法

摘要

涉及海洋生物毒素的多级膜分离提取制备工艺，尤其涉及一种主要以河豚鱼卵巢或/和肝脏为原料进行规模化提取制备河豚毒素高纯单体的方法，采用微滤，超滤，纳滤和反渗透等多种前沿膜分离技术高效组合协同作用，进行河豚毒素的规模化提取制备并得到河豚毒素结晶。具有高效可靠的优点，可批量获得纯度优于99％的河豚毒素提取物。制得的河豚毒素是神经中枢钠通道阻滞剂，潜在着独特的药用功能和不凡的药理作用，是具有显著经济效益的高值海洋药物资源。

主权项

1、河豚毒素高纯单体规模化制备方法，其特征在于制备工艺步骤为： 1)、原液制备：取经匀浆的河豚鱼卵巢或/和肝脏，加入原料重量1～5倍的去离子水， 控制pH2.5～7.5，在-2～15℃条件下进行成盐低温浸提，分离滤渣重复循环浸提2～4 次，浸提时间分别控制12～20h，合并各次浸提液获得制备原液备用， 2)、制备原液转入一级膜分离料罐，启动一级微滤膜分离系统装置，压力控制范围为 0.15～0.8MPa，温度控制范围为10～50℃，以低压力为推动力，除去原液中的悬浮微粒类 物质和部分有机物与胶体类组分物质，透过液经管道进入二级膜分离料罐； 3)、二级膜分离为超滤膜分离系统装置，以压力为推动力，利用高分子薄膜的选择渗 透性，在常温下使小于膜孔径的含毒低分子量物质透过膜而使高分子量的蛋白质，氨基酸， 多肽，酶组分物质被有效截留，二级膜分离活性透过液直接进入三级超滤膜分离系统，进 一步将分子量大于2000的非活性组分物质进行有效截留，操作压力控制范围为0.3～ 1.5MPa，温度控制范围为10～50℃，分离分子量范围为2×10³～1×10⁵，含毒活性透过液 进入四级膜分离料罐； 4)、四级膜分离为纳滤膜分离系统装置，膜表面孔径处于纳米级范围，分离的分子量 范围为350～2000，操作压力控制范围为0.5～5.0MPa，pH为2.5～7.5。利用纳滤膜的功 能特性，以压力为推动力，将分子量大于350的非活性组分物质进行高效截留，高活性含 毒透过液进入五级膜分离料罐； 5)、五级膜分离为次级纳滤膜分离或反渗透膜分离系统装置，以压差作为操作推动力， 工作压力为0.8～6.0MPa，温度控制10～50℃，pH2.5～7.5，利用次级纳滤膜或反渗透膜的 功能特性，对经过四级纳滤膜分离的高活性含毒透过液进行高效的脱水浓缩；收集经反渗 透膜或纳滤膜截留的高毒活性液进一步经真空浓缩至小体积备用； 6)、往高毒分离液中加入氨水调节pH8～10，2～15℃条件下静置得沉淀物河豚毒素结 晶，然后经高效液相制备色谱精制，真空冷冻升华干燥，得到纯品河豚毒素晶体。