双杀伤功能的重组腺病毒的构建及其在肿瘤治疗中的应用

摘要

双杀伤功能的重组腺病毒的构建及其在肿瘤治疗中的应用。它是以缺失E1的已构建的rAdCD、rAdTK及新鲜人肝癌旁正常组织为材料，分别行PCR扩增出CD、TK和ES基因片段，将CD－ES或TK－ES以融合基因的形式插入穿梭质粒(pAdTrack－CMV)，构成目的穿梭质粒(pAdTrack－CMVCDglyES或pAdTrack－CMVTKglyES)，再与腺病毒5型骨架质粒pAdEasy－1在细菌内同源性重组，获得重组腺病毒质粒，转染293细胞，获得二种双杀伤功能的重组腺病毒。所构建的重组腺病毒安全、稳定，能够从直接杀伤瘤细胞和抑制肿瘤新生血管形成，阻止瘤细胞远端转移间接杀伤瘤细胞两个途径杀伤肿瘤，是一种崭新的肿瘤基因治疗方法。

主权项

1、一种双杀伤功能的重组腺病毒的构建，其特征在于：该重组腺病毒是含CDglyES融合基因或TKglyES融合基因的重组腺病毒，它是以缺失E1区的rAdCD和rAdTK为材料，行PCR扩增CD和TK基因片段；以肝癌旁正常肝组织为材料，行RT-PCR扩增出ES基因片段，然后顺序将CD、ES或TK、ES插入pAdTrack-CMV穿棱质粒构建成目的穿梭质粒，将二种目的穿梭质粒分别与腺病毒pAdEasy-1骨架质粒在细菌中同源性重组，获得二种重组腺病毒质粒，分别转染293细胞，即可获得双杀伤功能的的二种重组腺病毒。