| 摘要 |
本发明系有关于一种柠檬铜锌型超氧歧化之选殖、表现、纯化、性质分析及应用等方法，其藉由聚合连锁反应(PCR)技术，自新鲜柠檬果实选殖出一铜锌型超氧歧化(Cu／Zn–superoxidedismutase,Cu／Zn–SOD)，此cDNA全长为744bp，可以转译出152个胺基酸，将其转殖入表现载体或在N–端接上9个胺基酸之Tat并将其转殖入表现载体，以E.cph或酵母菌作为表现宿主，500mL菌液经由1mMIPTG在37℃下诱发，可表现出具有活性的Cu／Zn–SOD(或Tat–Cu／Zn–SOD)；经亲和性管柱快速纯化后，获得2.7mg蛋白质其比活性为7456U／mg，即使经过4％SDS或pH值2.3～12处理对酵素的活性并不影响；在90℃处理下，其双倍体之解离常数为0.007min–1，活性半衰期为99min，柠檬Cu／Zn–SOD不易被蛋白trypsin与chymotrypsin水解；Imidazole的处理对酵素的活性并不影响；此Cu／Zn–SOD，可去除自由基，当Cu／Zn–SOD应用于化妆品可去除黑斑、雀斑及防止皱纹，且Cu／Zn–SOD加于烫伤药膏可加速伤口癒合，Cu／Zn–SOD用于整形外科之皮肤移植、人造皮移植，可防止移植皮肤之组织坏死，进而加速移植皮肤之缝合者。 |
