快速检测痕量有机磷农药的方法

摘要

快速检测痕量有机磷和氨基甲酸酯农药的方法。解决现有酶抑制法检测灵敏度低、准确度差的问题。本发明方法包括植物酯酶原酶液的制备、pH8.0缓冲液及酶溶液的制备、酶的固定、基质液和显色液制备、检测方法、结果判定(目测)等过程。本发明所使用的农药检测器是用聚苯乙烯微孔塑料条制成，塑料条上设有3个孔，中间为对照孔C，两边为样品孔S₁和S₂，每孔加酶溶液0.015～0.03ml，使内壁表面均被固定有植物酯酶，室温下或4℃冰箱自然凉干后，用无离子水冲洗，凉干制成。本发明开创性地使用植物酯酶代替常规方法使用的动物chE。不仅取材方便、制备简单容易、廉价，而且反应灵敏，有效地解决了杂质干扰问题。

主权项

1、一种用植物酯酶的固化酶抑制技术快速检测痕量有机磷农药的方法，其特征是该方法按以下步骤完成：第一、植物酯酶原酶液的制备：取面粉，按重量体积比1∶5比例加入蒸馏水，经振荡、离心，上清液过滤，滤液作为原酶液保存备用；第二、pH8.0缓冲液的制备：取46.8ml 0.1N NaOH溶液，加入50ml 0.1MKH2PO4溶液中，再加入适量牛血清白蛋白和戊二醛，加水至100ml；第三、酶溶液：取前述原酶液加入缓冲液中，使原酶液浓度为10～20％，充分混合均匀；第四、酶的固定：取聚苯乙烯微孔塑料条，塑料条上设有3个孔，中间为对照孔C，两边为样品孔S1和S2，每孔加酶溶液0.015～0.03ml，内壁表面均被固定有植物酯酶，室温下或4℃冰箱自然凉干后，用无离子水冲洗，凉干，室温干燥避光保存；第五、基质液和显色液制备：基质液：取醋酸-1-萘酯1.25mg置于试剂瓶中，加入基质溶解液1ml，振摇至基质完全溶解备用；显色液：取固兰B盐1.56mg置于试剂瓶中，加水1ml，振摇至固兰B盐全部溶解，备用；第六、检测：将待测样品液加入到样品孔S1和S2中，每孔各加2滴，使样品液与酶充分反应后甩掉样品液，再向每孔各加入2滴无离子水洗1次甩掉，然后向样品孔S1、S2和对照孔C各加1滴基质液和显色液，反应显色；第七、检测结果：S1和S2孔颜色与C孔相同或极相近似即均为紫红色，判为阴性，即样品中不含有有机磷农药或含量低于本法检测限；S1和S2孔或其中某一孔的颜色与C孔有明显差别，即S1和/或S2孔无色或其中某一孔的颜色比C孔明显的浅，则判为阳性，被检样品含有有机磷农药。