一种从微生物发酵液中纯化普伐他汀前体美伐他汀的方法

摘要

本发明涉及一种从微生物发酵液中纯化普伐他汀前体美伐他汀的方法，可用于降血脂药物中的研究和生产，其特点在于，含有美伐他汀的发酵液经过滤后，用水解酶处理，然后真空浓缩，再在酸性条件下将美伐他汀萃取到疏水性有机溶剂中，有机溶剂用弱酸性缓冲液洗涤后，真空浓缩至美伐他汀浓度大于300g/L，加入亲水性有机溶剂混合均匀，最后加入铵盐或氨水使美伐他汀转换为铵盐形式结晶析出。本发明的优点是美伐他汀以铵盐形式在常温下结晶纯化，生产能耗小，成本低，得率高，纯化得到的高纯度的美伐他汀铵盐，纯度不低于98％，对普伐他汀转化菌无毒性，可直接用于普伐他汀生产。

主权项

1.一种从微生物发酵液中纯化普伐他汀前体美伐他汀的方法，其特征在于，含有美伐他汀的发酵液经过滤后，用水解酶处理，然后真空浓缩，再在酸性条件下将美伐他汀萃取到疏水性有机溶剂中，有机溶剂用弱酸性缓冲液洗涤后，真空浓缩至美伐他汀浓度大于300g/L，加入亲水性有机溶剂混合均匀，最后加入铵盐或氨水，使美伐他汀转换为铵盐形式结晶析出。它包括以下步骤：(1).含有美伐他汀的发酵液经过滤后，用酸调节pH值为4-10；(2).在发酵液中加入水解酶，水解酶终浓度为0.1％～10％，调节pH值为6～10，在40～60℃下保温10～20小时；(3).酶降解液在0.08Mpa、50～90℃下减压浓缩，冷却到低于30℃；(4).浓缩液调节pH值为3～5，加入疏水性有机溶剂，充分搅拌混合10～20分钟，有机溶剂与浓缩液的体积比为1∶2；(5).高速离心分离有机相和水相，水相可以加入有机溶剂再萃取1～4次，弃水相，合并有机相；(6).有机相加入含有10～20％NaCl的微酸性缓冲液洗涤，有机相和缓冲液的体积比为2∶1，缓冲液pH值为5～7，高速离心分离水相和有机相，弃水相，重复洗涤有机相1～2次；(7).有机相加入无水Na2SO4，搅拌10～20分钟，然后过滤，在0.08MPa，30～90℃下真空浓缩至美伐他汀含量为250～350g/L；(8).浓缩液冷却到低于30℃，加入亲水性有机溶剂，有机溶剂终浓度50～95％，边搅拌边加入铵盐或氨水，使美伐他汀以铵盐形式结晶析出；(9).过滤收集美伐他汀铵盐晶体，用亲水性有机溶剂洗涤晶体，在40-60℃下真空干燥，HPLC检测美伐他汀纯度大于94％，得率大于80％；(10).美伐他汀铵盐可进一步通过重结晶提高纯度，最终得到的美伐他汀铵盐纯度大于98％。