咖啡因生物合成体系基因组的联合利用

摘要

提供一种在咖啡因生物合成反应体系中，联合利用分别催化这些反应的酶和分别编码这些酶的基因的方法。该方法为：将酶a.c.d.和细胞提取物b.的2个或2个以上组合，在生物体外，通过进行黄嘌呤核苷的甲基化、7－甲基黄嘌呤核苷的脱核糖化、7－甲基黄嘌呤的甲基化和/或可可碱的甲基化反应，生产7－甲基黄嘌呤、可可碱或咖啡因的方法。a.是催化在嘌呤环7位的黄嘌呤核苷的甲基化，具有序列1所示氨基酸序列的酶；b.是催化在嘌呤环9位的7－甲基黄嘌呤核苷的脱核糖化，由大肠杆菌得到的细胞粗提取物；c.是催化在嘌呤环3位的7－甲基黄嘌呤的甲基化，具有序列4所示氨基酸序列的酶；d.是催化在嘌呤环1位的可可碱的甲基化，具有序列7所示氨基酸序列的酶。

主权项

1、一种生产7-甲基黄嘌呤、可可碱或咖啡因的方法，是在下述酶(a)、(c)、(d)和细胞提取物(b)的2种或2种以上组合的催化作用下，在生物体外，进行在嘌呤环7位的黄嘌呤核苷的甲基化、在嘌呤环9位的7-甲基黄嘌呤核苷的脱核糖化、在嘌呤环3位的7-甲基黄嘌呤的甲基化、和/或在嘌呤环1位的可可碱的甲基化，生产7-甲基黄嘌呤、可可碱或咖啡因的方法，(a)是具有催化在嘌呤环7位的黄嘌呤核苷的甲基化的活性，具有序列表的序列号：1中所示氨基酸序列的酶，(b)是具有催化在嘌呤环9位的7-甲基黄嘌呤核苷的脱核糖化的活性，由大肠杆菌得到的细胞粗提取物，(c)是具有催化在嘌呤环3位的7-甲基黄嘌呤的甲基化的活性，具有序列表的序列号：4中所示氨基酸序列的酶，(d)是具有催化在嘌呤环1位的可可碱的甲基化的活性，具有序列表的序列号：7中所示氨基酸序列的酶。