| 主权项 |
1.一种从冬虫夏草(Cordyceps sinensis)分离出具有改善肺功能的活性组成部份(F4)之方法,其包括:将冬虫夏草菌株之子实体部份接种于包括下列成分之液相培养基中:葡萄糖 2%蛋白 0.5%麦芽抽出物 2%马铃薯-葡萄糖浸出物24克/升于261.0℃下静置培养30天,收集其子实体,置于45~50℃烘乾,研粉,以10倍体积之甲醇抽取48小时,将抽提液浓缩,用氧化矽管柱层析术用正己烷和乙酸乙酯为溶媒,经氧化矽凝胶管柱层析分离成6个冲提液份CS-F1.CS-F2.CS-F3.CS-F4.CS-F5和CS-F6之划分,其中,由低极性到高极性依分离出6个划分之正己烷与乙酸乙酯溶媒比例依序为:(20:1)、(10:1)、(5:1)、(2:1)、(1:1)、(0.5:1),并在浓缩后,于CS-F4划分所得到的活性组成部份(F4)在矽胶薄片上之滞流値约为0.56,并对各浓缩物以离体控制血小板活化因子诱发免子血小板凝集活性检定法进行监定,测知主要活性出于CS-F3.CS-F4和CS-F5,继而从活体内(in vivo)肺功能检定法所得剂量反应曲线得知,主要最大活性出现于CS-F4而分离出该具有改善肺功能的活性组成部份(F4)。2.如申请专利范围第1项所述之方法,其中冬虫夏草分离所得具有改善肺功能的活性组成部份为(F4)。3.一种从冬虫夏草(Cordyceps sinensis)分离出具有改善肺功能的(24R)-ergosta-7,22-diene-3,5,6-triol之方法【即(24R)-麦角甾-7,22-二烯-3,5,6-三醇]之方法】,其包括:将冬虫夏草菌株之子实体部份接种于包括下列成分之液相培养基中:葡萄糖 0.5%蛋白 0.5%麦芽抽出物 2%马铃薯-葡萄糖浸出物24克/升于261.0℃下静置培养30天,收集其子实体,置于45~50℃烘乾,研粉,以10倍体积之甲醇抽取48小时,将抽提液浓缩,用氧化矽管柱层析术用正己烷和乙酸乙酯为溶媒,经氧化矽凝胶管柱层析分离成6个冲提液份CS-F1.CS-F2.CS-F3.CS-F4.CS-F5和CS-F6之划分,其中,由低极性到高极性依分离出6个划分之正己烷与乙酸乙脂溶媒比例依序为:(20:1)、(10:1)、(5:1)、(2:1)、(1:1)、(0.5:1),并在浓缩后,于CS-F4划分所得到的活性组成部份(F4)在矽胶薄片上之滞流値约为0.56,并对各浓缩物以离体控制血小板活化因子诱发免子血小板凝集活性检定法进行监定,测知主要活性出于CS-F3.CS-F4和CS-F5,继而从活体内(in vivo)肺功能检定法所得剂量反应曲线得知主要最大活性出现于CS-F4而分离出该具有改善肺功能的活性部份(F4),将该活性部份用二氯甲烷-甲醇(100:1至1:1(v/v)作为冲提溶剂进行氧化矽凝胶管柱层析术(70-230mesh,540公分)配合离体抑制血小板活化因子诱发免子血小板凝集之活性检定进行监定而收取比例为10:1(v/v)之出提液份,将具有改善肺功能的活性冲提液份浓缩,以甲醇-氯仿再结晶而得活性化合物(F8)。4.一种根据申请专利范围第3项所述分离(24R)-ergosta-7,22-diene-3,5,6-triol之方法,其中从冬虫夏草分离所得具有改善肺功能的活性化合物(F8)为:(24R)-麦角甾-7,22-二烯-3,5,6-三醇((24R)-ergosta-7,22-diene-3,5,6-triol);其分子式为:C28H46O3,分子量为430克/莫耳;熔点:243-245℃质谱(EIMS)(m/z):430(M+),412,394,379,287,269,251,227,225,197。1H-NMR(CDC13,500 MHz)d:5.33(1H,m,H-7),5.14-5.20(2H,m,H-22, and H-23),4.08(1H,m,H-3),3.59(1H,m,H-6),1.06(3H,s,H-19),1.01(3H,d,J=6.5 Hz,H-21),0.90(3H,d,J=6.5 Hz,H-28),0.82(3H,d,J=7.5 Hz,H-26),0.80(3H,d,J=7.0 Hz,H-27),0.58(3H,s,H-18)。1H-NMR(CDC13,200 MHz)d:5.05-5.30(4H,m,H-3,H-7,H-22,和H-23),4.80(1H,m,H-6),2.06(3H,s,0=C-CH3),2.03(3H,s,=C-CH3)13C-NMR(CDC13,500 MHz)d:144.0(C-8),135.3(C-22),132.1(C-23),117.5(C-7),76.7(C-5),75.9(C-6),67.7(C-3),55.9(C-17),54.7(C-14),43.7(C-13),43.4(C-9 or C-24),42.8(C-24 or C-9),40.4(C-4),49.5(C-20),39.2(C-12),37.1(C-10),33.1(C-2),32.9(C-25),30.8(C-1),27.9(C-16),22.9(C-15),22.0(C-11),21.1(C-21),19.9(C-26 or 27),19.6(C-27or26),18.8(C-19),17.5(C-28),12.3(C-18).其构造式为:(24R)-麦角甾-7,22-二烯-3,5,6-三醇[(24R)-ergosta-7,22-diene-3,5,6-triol]5.如申请专利范围第2项之冬虫夏草分离出具有改善肺功能的活性组成部份(F4),其可用于抑制血小板活化因子诱发兔子血小板凝集,并可预防性及/或治疗性改善气喘后期反应之阻塞性肺功能恶化,强化Th1细胞激素表现,降低iNOS基因表现,改善肺组织学变化以阻断往后造成肺伤害步骤之进展。6.如申请专利范围第4项所述从冬虫夏草分离出的具有改善肺功能之活性化合物(F8)[即(24R)-ergosta-7,22-diene-3,5,6-triol],其可用于抑制血小板活化因子诱发免子血小板凝集,并可预防性及/或治疗性改善气喘后期反应之阻塞性肺功能恶化,强化Thi细胞激素表现,降低iNOS基因表现,改善肺组织学变化以阻断往后造成肺伤害步骤之进展。图式简单说明:第1图系根据本发明分离方法自冬虫夏草子座抽取活性组成及活性成份之流程图。第2图系本发明活性化合物F8之氢核磁共振(1H-NMR)光谱图。第3a图系本发明活性化合物F8之乙醯化产物之1H-NMR光谱图。第3b图系第3a图中所示1H-NMR谱内0.4PPM至2.2PPM范围的扩大图。第4图本发明活性化合物F8之13C-NMR光谱。第5-a图系本发明棕色挪威鼠肺组织丙种干扰素基因表现之图示;N:正常未处理之对照组;OA:以卵白蛋白诱发气喘;OA+F4:在卵白蛋白诱发气喘时并用预防性F4(每组各6只)。第5-b图系本发明棕色挪威鼠肺组织Th2基因表现之图示;N:正常未处理之对照组;OA:以卵白蛋白诱发气喘;OA+F4:在卵白蛋白诱发气喘时并用预防性F4(每组各6只)。第6-a图系本发明棕色挪威鼠肺组织丙种干扰素基因表现之图示;N:正常未处理之对照组;OA:以卵白蛋白诱发气喘;OA+F4:在卵白蛋白诱发气喘时并用预防性F4(每组各6只)。第6-b图系本发明棕色挪威鼠肺组织Th2基因表现之图示;N:正常未处理之对照组;OA:以卵白蛋白诱发气喘:OA+F4:在卵白蛋白诱发气喘时并用预防性F4(每组各6只)。第7-a图系本发明棕色挪威鼠肺组织丙种干扰素基因表现之图示;N:正常未处理之对照组;OA:以卵白蛋白诱发气喘;OA+F8:在卵白蛋白诱发气喘时并用预防性F8(每组各6只)。第7-b图系本发明棕色挪威鼠肺组织Th2基因表现之图示;N:正常未处理之对照组;OA:以卵白蛋白诱发气喘;OA+F8:在卵白蛋白诱发气喘时并用预防性F8(每组各6只)。第8-a图系本发明棕色挪威鼠肺组织丙种干扰素基因表现之图示;N:正常未处理之对照组;OA:以卵白蛋白诱发气喘;OA+F8:在卵白蛋白诱发气喘时并预防性F8(每组各6只)。第8-b图系本发明棕色挪威鼠肺组织Th2基因表现之图示;N:正常未处理之对照组;OA:以卵白蛋白诱发气喘;OA+F8:在卵白蛋白诱发气喘时并用预防性F8(每组各6只)。第9-a图系本发明棕色挪威鼠肺组织氧化氮合成基因表现之图示;N:正常未处理之对照组;OA:以卵白蛋白诱发气喘;OA+F4:在卵白蛋白诱发气喘时并用预防性F4(每组各6只)。9-b图系本发明棕色挪威鼠肺组织氧化氮合基因表现之图示:N:正常未处理之对照组;OA:以卵白蛋白诱发气喘;OA+F4:在卵白蛋白诱发气喘时并用预防性F4(每组各6只)。第9-c图系本发明棕色挪威鼠肺组织氧化氮合成基因表现之图示;N:正常未处理之对照组;OA:以卵白蛋白诱发气喘;OA+F4:在卵白蛋白诱发气喘时并用预防性F4(每组各6只)。第9-d图系本发明棕色挪威鼠肺组织氧化氮合成基因表现之图示;N:正常未处理之对照组;OA:以卵白蛋白诱发气喘;OA+F4:在卵白蛋白诱发气喘时并用预防性F4(每组各6只)。第10图系本发明预防性吸入投予活性部份对卵白蛋白诱发棕色挪威鼠气喘之肺功能明显改善50%全肺容积时用力吐气流速之图示(*P値<0.05)。第11图系本发明预防性吸入投予活性部份对卵白蛋白诱发棕色挪威鼠气喘之肺功能明显改善25%全肺容积时用力吐气流速之图示(*P値<0.05)。第12图系本发明预防性吸入投予活性化合物对卵白蛋白诱发棕色挪威鼠气喘之肺功能明显改善50%全肺容积时用力吐气流速之图示(*P値<0.05)。第13图系本发明预防性吸入投予活性化合物对卵白蛋白诱发棕色挪威鼠气喘之肺功能明显改善25%全肺容积时用力吐气流速之图示(*P値<0.05)。第14图系本发明治疗性吸入投予活性部份对卵白蛋白诱发棕色挪威鼠气喘之肺功能明显改善50%全肺容积时用力吐气流速之图示(*P値<0.05)。第15图系本发明治疗性吸入投予活性部份对卵白蛋白诱发棕色挪威鼠气喘之肺功能明显改善25%全肺容积时用力吐气流速之图示(*P値<0.05)。第16图系本发明治疗性吸入投予活性化合物对卵白蛋白诱发棕色挪威鼠气喘之肺功能明显改善25%全肺容积时用力吐气流速之图示(*P値<0.05)。第17图系本发明治疗性吸入投予活性化合物对卵白蛋白诱发棕色挪威鼠气喘之肺功能明显改善50%全肺容积时用力吐气流速之图示(*P値< 0.05)。第18图系本发明活性化合物对肺助能改善之剂量曲线之图示。 |
