Isoelektrische Fokussierung auf immobilisierten pH-Gradienten

摘要

Die Erfindung beinhaltet Methoden zur Durchführung von isoelektrischen Fokussierungen auf immobilisierten pH-Gradienten (IPG) über Distanzen größer als 30 cm. Zentraler Punkt der Erfindung ist die Herstellung von langen IPGs und die Anwendung von mehr als 10000 Volt über eine Distanz von mehr als 30 cm. In einer bevorzugten Variante werden die Proteine während der Rehydratation der IPG-Streifen bei niedrigen Voltzahlen kleiner als 1250 Volt in einer Rehydratationskammer aktiv in die IPG-Streifen eingebracht. Die IPG-Streifen werden anschließend in eine zweite Elektrophoresekammer mit weiten Elektroden transferiert, können gegebenenfalls aber auch in der Kammer zur anschließenden Elektrophorese verbleiben. Der Kontakt zu den IPG-Streifen wird bevorzugt über ein leitendes Medium - wie zum Beispiel wässrige Chemikalien enthaltende Lösung getränkte Filterpapierstreifen - an beiden Enden der Streifen hergestellt. Diese Filterpapierstreifen werden in zeitlichen Abständen während der isoelektrischen Fokussierung ausgewechselt. Die durch diesen Prozess gewährleistete Entfernung von in den Filterstreifen akkumulierenden Ionen ist sehr vorteilhaft für hochwertige Resultate. Die Kombination von aktiver Rehydratation und austauschbaren Filterpapierstreifen in einer separaten IEF-Kammer wurde bisher nicht eingesetzt und wird hiermit für isoelektrische Fokussierungen mit IPG-Streifen von über 30 cm bereitgestellt.