人鼻咽组织特异性基因NASG编码蛋白及其抗体的制备

摘要

人鼻咽组织特异性基因NASG编码蛋白及其抗体的制备。本发明采用成人鼻咽组织cDNA制备检测子(tester)，以成人食管、肺、肝、心、胃、脾、肌肉、肾和皮肤cDNA制备驱赶子(driver)，采用抑制性消减杂交技术获得14个鼻咽差异表达基因的cDNA片段。NASG基因在人鼻咽组织特异性表达且在鼻咽癌中表达下调(34/48)，NASG编码产物及其抗体的制备将为鼻咽癌的基因诊断和治疗提供新的手段。基因诊断的特点是灵敏度高、特异性强、取材一般不受组织或时相限制，能够实现鼻咽癌的早诊断、早发现和早治疗。是一种全新的治疗策略，有望实现鼻咽癌的无创伤性、根治性治疗。

主权项

1.一种人鼻咽组织特异性基因NASG编码蛋白的制备方法，其特征在于：本发明利用鼻咽组织特异性基因和鼻咽癌易感基因，对在鼻咽组织特异性表达且在鼻咽癌表达下调基因NASG的编码蛋白，其具体方案为：1>GST/NASG融合蛋白的原核表达：①据原核表达载体pEGX-4T-2的GST阅读框架设计引物，使NASG基因的编码区阅读框与GST的阅读框架一致；②以成人鼻咽cDNA文库为模板，PCR扩增NASG基因的编码区，回收PCR产物条带；③将pEGX-4T-2载体分别与NASG基因连接，构建成符合读框的融合基因；④挑单个阳性菌落接种入含氨卞青霉素(100μg/ml)的2ml LB培养液中，37℃，过夜培养；将50μl过夜培养物分别接种到5ml含氨卞青霉素(100μg/ml)的LB培基中，于37℃培养2h，加入IPTG至终浓度为1mmol/L，37℃，在培养的不同时刻各取1ml转移至微量离心管中，离心去上清，将沉淀重悬于25μl TE中，再加25μl 2×SDS凝胶加样缓冲液中，混匀菌液，20kHz超声破碎，收集上清液；在12％SDS-聚丙烯酰胺凝胶中各加15μl上清进行电泳，80-120V室温电泳8h，考马斯亮蓝染色，观察到NASG融合蛋白的表达；2>融合蛋白的分离纯化：用谷胱苷肽Sepharose 4B过柱分离、纯化融合蛋白。